基于分子印迹技术分离富集葡萄皮渣中的齐墩果酸

Oleanolic acid is a pentacyclic triterpene acids naturally occurring in many plants, and possess anticancer, antimutagenic, antihyperlipidemic, antiatherogenic anti-inflammatory, and antioxidative activities. In the present study, Molecular imprinted polymers(MIPs) were prepared through thermal polymerization by using oleanolic acid as template molecule， ethylene glycol dimethacrylate (EGDMA) as the cross-linker and azobisisobutyronitrile (AIBN) as initiator in the porogen. The influence of the type and ratio of functional monomer and porogen on the MIPs was investigated. UV spectrum, scanning electron micrograph (SEM), specific surface area analyzer, fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR) and nuclear magnetic resonance were used to characterize the MIPs. The adsorption property, kinetic and thermodynamics of the MIPs was evaluated by equilibrium adsorption experiment. The MIPs were used as the sorbents for the separation and purification OA from grape residual, and then the OA was identified by UPLC-MS/MS. The present study can provided help for the deep development of grape resources and application in pharmaceutical industry．

齐墩果酸（Oleanolic acid, OA)是五环三萜类化合物，广泛分布于植物界，在葡萄皮渣中尤为丰富。具有护肝、解毒、抗癌、抗突变、降血脂、延缓动脉粥样硬化、抗炎及抗氧化等药理活性。但是，富含OA的葡萄皮渣常作为工业废料被丢弃，造成资源浪费和环境污染。因此，本研究以OA为模板分子，制备对OA具有高度亲和性的分子印迹聚合物（Molecular imprinted polymers, MIP），并考察不同功能单体、致孔剂及其用量对MIP特异性识别能力的影响。同时使用紫外光谱、红外光谱、扫描电镜、核磁共振等技术对MIP进行表征。采用静态吸附试验来研究MIP的吸附性能、吸附热力学和动力学。最后，将制备的MIP作为固相吸附剂用于分离纯化葡萄皮渣中的OA，制备高纯度的OA。为OA简便、高效的分离纯化工艺的建立、葡萄资源的深度开发和在医药工业中的应用提供科学依据。

齐墩果酸（OA)是一种五环三萜类化合物，广泛分布于多种植物中，具有护肝、抗癌、降血脂、抗氧化等活性。但目前OA的制备操作繁琐、分离效率低。本研究制备了OA印迹聚合物，对葡萄皮渣中OA实现了有效分离和纯化。结果如下：（1）采用Gaussian09 软件计算模板分子OA与三氟甲基丙烯酸（TFMAA）、α-甲基丙烯酸（MAA)、丙烯酰胺（AM）、4-乙烯基吡啶（4-VP）的成键情况、反应结合能及溶剂化能。结果显示，当OA-TFMAA (1:1, mol/mol)、OA-MAA (1:1, mol/mol)、OA-4-VP (1:2, mol/mol) 结合时，均可形成稳定的氢键复合物，结合能分别为-70.99、-66.40和-68.93kJ/mol，模板和单体在三氯甲烷中溶剂化能最小。（2）根据计算结果，采用本体聚合制备了OA-MIPs，对OA最大结合量13.6mg/g，平衡吸附时间80min。但该法制备的MIPs结合位点深、形貌不规则，不适合作为填料使用。为改善MIPs性能，后续实验采用沉淀和表面聚合法制备OA-MIPs。（3）以MAA为单体，乙腈+乙醇（3:1, v/v）为溶剂，DVB+EGDMA（4:1，mol/mol）为交联剂，沉淀聚合制备OA-MIPs。扫描电镜表明MIPs形貌规则，平均粒径为3.15µm；热重分析显示MIPs具有较高的热稳定性；OA在MIPs上的吸附符合Scatchard模型，最大结合量17.3 mg/g；吸附动力学数据符合准二级动力学模型，吸附平衡时间80min；印迹因子（IF）为10.2，具有较高的选择性。（4）为提高MIPs的吸附速率，以poly(4-VP-co-DVB/TRIM)微球为内核，MAA为功能单体，通过两步沉淀法制备OA表面印迹聚合物（SMIPs）。结果表明，SMIPs吸附性能大大提高，最大结合量27.4 mg/g，吸附行为符合Scatchard模型；结合平衡时间缩短到40 min，动力学吸附数据符合准二级动力学模型；选择性吸附实验表明，IF达到12.4。（5）以SMIP为填料，制备分子印迹固相萃取（MISPE）柱,分离纯化葡萄皮渣中的OA。在上样溶剂为乙醇，淋洗液为甲醇、洗脱液为甲醇+乙酸（8:2，v/v）的优化条件下，OA含量由粗提物中的13.4%提高到93.2％，回收率为89.0%。同时MISPE柱具有较好的再生性能。