UVB对系统性红斑狼疮自噬的影响及miR-125b在此过程中的作用和机制的研究

As one of the basic phenomeneons of cells, autophagy plays an important role in immunity system. It is well-known that ultraviolet B(UVB)can induce and aggravate SLE. Recent studies reveal that the level of autophagy in some skin cells can be affected by UVB. However,the effect of UVB on the autophagy of SLE is not still clarified. Our previous studies found that: The expression of miR-125b in peripheral blood mononuclear cells from patients with SLE and normal populations were significantly different after exposed to UVB. Meanwhile, miR-125b predicted downstream target sites of autophagy. Therefore, we propsoed the hypothesis: miR-125b may take part in the process of autophagy which meditates the pathogenesis of SLE. The present project intends to explore the impacts of UVB on the autophagy ability of SLE, and confirm miR-125b expression in the process. By selective regulation of miR-125b expression and dual-luciferase assay to confirm the downstream target genes of miR-125b. Our project will verify the effect of UVB on autophagy in SLE, and clarify the mechanism of miR-125b regulation of autophagy. Our project will also provide an experimeantal basis to learn about the possible mechanism of novel targets for the prevention and treatment of SLE.

细胞自噬是生命的基本现象。已发现自噬在免疫系统中发挥重要作用。研究提示UVB可以影响细胞的自噬水平。作为影响SLE重要因素，目前尚不清楚UVB是否通过自噬影响SLE。前期我们通过miRNA芯片技术发现：UVB照射SLE患者和正常人外周血单一核细胞（PBMC），不同人群的PBMC照射前后miR-125b会出现明显的差异表达，且预测的其下游靶点存在调控自噬相关基因。为此，我们猜测:UVB照射后，SLE发生异常自噬，miR-125b参与异常自噬的整个过程。针对此假设，本研究拟多层次观察UVB照射对SLE自噬的影响，以及miR-125b在异常自噬过程中的表达，通过选择性调控miR-125b表达技术及荧光素酶报告载体等方法验证miR-125b作用的下游自噬相关靶基因。研究结果有助于进一步阐明UVB、自噬和SLE三者之间的关系，并为研究紫外线诱发SLE的机制和防治提供新思路。

项目背景：研究提示UVB可以影响细胞的自噬水平。前期我们通过miRNA芯片技术发现：UVB照射SLE患者和正常人外周血单一核细胞（PBMC），不同人群的PBMC照射前后miR-125b会出现明显的差异表达，且预测的其下游靶点存在调控自噬相关基因。为此，我们猜测UVB照射后，SLE发生异常自噬，miR-125b参与异常自噬的整个过程。针对此假设，本研究拟多层次观察UVB照射对SLE自噬的影响，以及miR-125b在异常自噬过程中的表达，通过选择性调控miR-125b表达技术及荧光素酶报告载体等方法验证miR-125b作用的下游自噬相关靶基因。研究结果有助于进一步阐明UVB、自噬和SLE三者之间的关系，并为研究紫外线诱发SLE的机制和防治提供新思路。研究内容：1. UVB对Jurkat T细胞自噬水平和miR-125b-5p的影响2. UVB对SLE患者外周血T细胞自噬和miR-125b-5p的影响3. miR-125b-5p下游自噬相关靶位点的筛选及鉴定4.选择性调控miR-125b-5p的表达对UVB作用Jurkat T细胞后自噬水平的影响。重要结果及数据：1. 本实验结果提示一定强度范围内UVB可以诱导Jurkat细胞产生自噬，尤其当UVB剂量为50mj/cm2、照射后24小时可观察到自噬水平明显升高。2. UVB照射能够降低SLE患者外周血单个核细胞内miR-125b-5p的表达水平，并提高自噬相关基因如LC3 II、Beclin-1、UVRAG的表达水平。3. UVRAG是miR-125b-5p的下游靶基因。4. 过表达miR-125b-5p可降低UVRAG的表达水平和细胞的自噬水平。5. UVB可能通过降低SLE患者外周血单个核细胞内miR-125b-5p的表达水平而提高下游靶基因UVRAG的表达水平和增加细胞自噬来参与SLE的发病。科学意义：1.进一步丰富UVB对细胞自噬生物学作用的认识，研究成果有助于加深自噬在自身免疫性疾病中的作用和调控复杂性等方面的理解；2.从自噬这一新的角度，重新认识UVB照射诱发SLE的机制，是SLE的复杂发病机制研究的补充和发展；3.通过阐明miR-125b参与调控UVB诱发SLE发生异常自噬的作用，为进一步拓展miRNAs在UVB、自噬和SLE三者关系作用的研究打下基础。