间充质干细胞治疗系统性红斑狼疮的疗效和机制的探讨

Umbilical cord mesenchymal stem cells (UC-MSCs) transplantation in the treatment of SLE has certain effect, but the mechanism of homing and distribution after treatment is still not clear. Preliminary research suggests osteopontin (OPN) involving in the process of kidney injury and participating in the regulation of T cell differentiation. miRNA chip technology is found that the miRNA - 181 expressed in SLE patients, which predicts its bioinformatics and adjusts the genes of T cell differentiation. Therefore, we hypothesis: UC - MSCs transplantation could adjust T cells involving in cell-mediated immune response and affecting the expression of miRNA – 181.The miRNA - 181 directly or indirectly regulate the expression of OPN, affecting the Wnt, NF - KB signaling pathway to improve SLE patient. To this hypothesis, this research intends to observe from different aspects of effects of UC - MSCs transplantation in the treatment of SLE, applicating WB, real time quantitative PCR and dual luciferase reporter gene vector to analyze target genes mRNA181 role and relationship with osteopontin, and exploring the role of signaling pathways for clinical treatment of SLE ,and providing new ideas to explore the pathogenesis of SLE.

间充质干细胞（UC-MSCs）移植治疗SLE有一定效果，但其作用机制和治疗后的归巢和分布还不清楚。前期研究提示骨桥蛋白（OPN）参与了肾损伤过程并参与调控T细胞的分化形成。miRNA芯片技术发现：miRNA-181在SLE病人中表达下降，生物信息学预测其与调节T细胞分化的基因有关。为此，我们猜测：UC-MSCs移植后调节T细胞参与细胞介导的免疫反应影响 miRNA-181的表达，miRNA-181直接或间接调控OPN的表达，影响 Wnt、NF-KB等信号通路改善SLE病情。针对此假设，本研究拟多层次观察UC-MSCs移植治疗SLE的疗效，应用 WB、实时定量PCR和双荧光素酶报告基因载体分析mRNA181作用的靶基因及与骨桥蛋白的关系，探索其作用的信号通路，为临床治疗SLE和探讨SLE发病机制提供新思路。

（一）背景.间充质干细胞（MSCs）对系统性红斑狼疮（SLE）患者具有一定的治疗作用，然而其机制尚不清楚。同时，一些研究发现T淋巴细胞功能失调及microRNA-181a（miR-181a）、osteopontin (OPN)的异常表达与SLE发生、发展密切相关。.（二）方向.明确miR-181a的靶基因，并研究MSCs对SLE患者外周血T淋巴细胞的影响，探讨SLE的发病机制及MSCs治疗SLE的作用机理。.（三）主要内容.1.UC-MSCs在狼疮小鼠不同器官中的分布情况和归巢.2.UC-MSCs 治疗狼疮小鼠疗效和及相关指标的变化.3.UC-MSCs移植治疗SLE机制的探索.（四）重要结果及关键数据.1.UC-MSC在正常C57小鼠及狼疮小鼠的肾脏、肺脏、肝脏中均有归巢现象，但以狼疮小鼠更为明显及持久。.2.UC-MSC移植治疗后，狼疮小鼠体重增加，抗ds-DNA、ANA抗体滴度低于对照组，肾脏中OPN及mir181a的表达降低。.3. 1）H_TNF和H_SPP1野生型具有microRNA-181a作用的靶位点。2）miR-181a过表达使Jurkat细胞的OPN、TNF-α、NF-kB及β-catenin的表达明显降低；相反， miR-181a干扰表达使Jurkat细胞的OPN、TNF-α、NF-kB及β-catenin的表达则明显增高。3）（1）与UC-MSCs共培养的Jurkat细胞的OPN、TNF-α、NF-kB及β-catenin表达明显降低，而miR-181a表达明显增高；（2）与UC-MSCs共培养后SLE患者T淋巴细胞的增殖活明显下降，培养细胞上清液中IFN-r、IL4、IL6及IL10的测得值明显降低，T淋巴细胞中TNF-α、NF-kB、OPN及β-catenin的表达明显下降，而miR-181a的表达明显增高。.（五）科学意义.miR-181a的表达下调及OPN的表达增高可能促进了SLE的发生、发展。动物实验表明UC-MSCs可以归巢到狼疮小鼠的重要脏器中，同时体外实验表明UC-MSCs可以对SLE患者的T淋巴细胞可以产生明显调节作用。我们推测在人体内MSCs可以归巢到SLE患者重要器官中直接发挥治疗作用，另一方面MSCs可以通过上调miR-181a来抑制T淋巴细胞中OPN及其他SLE相关炎症因子的表达而发挥对SLE的治疗作用。