肺肿瘤细胞表达免疫球蛋白G的分子机制及其对肿瘤生长的影响

免疫球蛋白G在机体免疫反应、B细胞活化和抗体产生的调控中发挥重要的作用。传统观念认为其主要由B淋巴细胞产生。申请者课题组近期证明这种蛋白存在于上皮来源的肿瘤细胞中，如肺癌、肝癌、乳腺癌、宫颈癌等。免疫球蛋白在肿瘤细胞表达的病理学意义、功能和分子机制尚不清楚。肺肿瘤的发病率和死亡率极高，本研究基于肿瘤细胞表达免疫球蛋白G的实验基础，利用肺肿瘤组织和肺肿瘤细胞系作为突破口：①采用组织芯片技术研究免疫球蛋白G的表达和肺肿瘤的良恶性、分级、分化之间的关系，并采用RNAi、基因芯片、流式细胞术等分子生物学方法研究免疫球蛋白G对肺肿瘤细胞的生长、细胞周期的影响；②借鉴免疫球蛋白在B淋巴细胞中表达的经典途径研究肿瘤细胞产生免疫球蛋白的调控机制。通过阐明免疫球蛋白G在肺肿瘤细胞中表达的分子机制及其对肿瘤生长的影响，项目将为经典的免疫学理论补充新的内容，为肿瘤诊断及诊治提供科学的依据。

.肺癌在许多国家都是发病最多的恶性肿瘤，但我们对于它的生长、增殖、转移机制却知之甚少。在本课题中，我们探讨了免疫球蛋白G（IgG）基因在肺鳞状细胞癌、腺癌及其相关细胞系中的表达，发现了IgG本身、合成IgG的必要辅酶，如重组激活酶1（RAG1）、重组激活酶2(RAG2)、激活诱导腺苷脱氨酶(AID)的mRNA大量的表达于癌细胞中。为了验证癌细胞表达IgG这个现象的广泛性，我们检测了甲状腺癌、结肠癌、乳腺癌和肉瘤细胞系中IgG的表达情况，并且得到到类似肺癌的结果。在观察了IgG在大量不同癌组织中的表达情况，并且与临床病理参数进行统计分析后，我们发现IgG的表达与肿瘤的分期、分级、淋巴结转移有关。..为了更好的理解IgG在癌细胞中合成的过程，我们研究了RAG激活的机制。通过RT-PCR、蛋白印记、免疫荧光等方法，我们发现转录因子E2A、 FOXO1和 FOXP1表达并定位于癌细胞核中，增高E2A、 FOXO1和 FOXP1表达将使RAG得表达量增加，降低E2A、FOXO1和 FOXP1表达，RAG的表达也同时下降。这些结果类似于B淋巴细胞，预示着癌细胞里有着类似于B淋巴细胞的免疫球蛋白基因重排机制。..为了更好的理解IgG在癌细胞中所起的作用，我们做了一系列的关于肿瘤生长、增殖、迁徙的功能实验。我们发现利用siRNA下调IgG表达的同时能够使癌细胞的迁移和粘附能力下降。而且伴随IgG下降的同时，转移相关基因MTA1也表达下降，预示着IgG能够通过MTA1实现调控肿瘤的转移。我们在癌细胞系中利用免疫共沉淀的方法筛选出27个与IgG相关的蛋白，在它们中间，RACK1、RAN 和PRDX1三个蛋白与细胞的生长及氧化应激反应有极其紧密的关系。因此我们对IgG、RACK1、 RAN 和PRDX1及它们之间的关系和作用进行了深入的研究。通过免疫共沉淀实验，我们发现IgG、RACK1、 RAN 和PRDX1之间能够相互作用，并且 IgG能够调节癌细胞中的活性氧族的合成，进而通过MAPK/ERK信号途径导致癌细胞的增殖及生长。..总之，IgG在包括肺癌的多种癌组织中表达，癌组织中IgG的表达调控机制类似于B淋巴细胞，IgG能够促进癌细胞的增殖、生长与转移，显示了重要的作用，IgG有可能成为诊断的标记物，和治疗癌症的靶点。.