AQP4在电针抗脑缺血再灌注后血脑屏障损伤中的作用研究

本项目在我们以往长期关于脑缺血的临床和实验研究工作的基础之上，结合我们关于脑缺血再灌注后水通道蛋白-4的表达和血脑屏障损伤的变化相互关系的理论思考和预初研究结果，拟采用大鼠大脑中动脉线栓方法建立脑缺血再灌注模型，借助免疫组织化学、western blot、RT-PCR、免疫电镜和siRNA等技术观察电针、水通道蛋白-4和血脑屏障之间的关系，以期用生命科学的语言阐明水通道蛋白-4在电针人中穴、百会穴抗脑缺血再灌注后血脑屏障损伤中的作用机制，为电针抗脑缺血再灌注后血脑屏障损伤的理论研究和脑水肿的治疗提供新思路，为进一步研究电针抗脑水肿以及电针治疗脑缺血的机理提供科学实验依据，从而指导临床实践。

本研究采用大鼠大脑中动脉线栓方法建立改良的脑缺血再灌注模型，将大鼠随机分为5组，每组再分再灌注后6h、12h、24h、48h及72h五个时程，分别进行缺血时局部脑血流监测和神经功能缺损评分评定，并借助免疫组织化学、western blot、RT-PCR、电镜、激光共聚焦和siRNA等技术观察电针、水通道蛋白-4（AQP4）、脑水肿和血脑屏障之间的关系。研究发现：（1）改良的脑缺血再灌注模型缺血效果确切可靠，稳定性好，手术时间短，优于传统方法。（2）首次采用CV染色法测定脑水肿，不但减少了实验动物的数量，而且降低了实验过程中的测试误差，提高了实验数据的准确性，是对脑水肿传统测定方法的革新。（3）大鼠神经神经功能缺损评分与脑水肿肿胀率呈正相关，与AQP4的表达呈正相关，与ZO-1的表达呈负相关。（4）电针人中穴、百会穴及AQP4 siRNA能有效地抑制AQP4的表达及ZO-1蛋白的降低，减轻血脑屏障的损伤，减少脑水肿的产生，改善神经功能缺损评分。（5）AQP4对维持血脑屏障的完整性，在血管源性脑水肿的病理生理变化中发挥着重要的作用，电针对脑缺血再灌注后血脑屏障的保护作用，是通过调节AQP4的表达实现的。