肌球蛋白轻链激酶调节实验性动脉粥样硬化兔动脉内皮细胞通透性分子机制的研究

血管内皮细胞是血管壁组织和血液之间的第一道屏障，其结构和功能的损伤可导致内膜通透性增加是动脉粥样硬化(AS)发生、发展过程中重要的一环。动脉内膜通透性与内皮细胞收缩、细胞间连接蛋白的结构、功能是否正常密切相关。我们先前的研究表明实验性AS兔动脉内膜的通透性明显增加，且动脉壁MLCK表达逐渐增强、活性升高，提示在实验性AS形成过程中，MLCK表达和活性的增加与动脉内膜通透性加大密切相关。MLCK是否引起动脉内皮细胞的连接发生变化而导致内膜通透性变化？如何调控？尚不清楚。本项目将复制实验性兔AS模型，通过MLCK抑制剂的干预，建立高胆固醇血症细胞模型，通过MCLK、MEK抑制剂等干预和MLCK RNA干扰实验，分析实验性AS兔动脉壁MLCK的表达及其活性是否参与调控实验性AS兔动脉内皮细胞连接蛋白的表达、分布而影响内膜通透性，为进一步研究打下基础。

本研究复制了实验性兔AS模型，用MLCK抑制剂ML-7进行干预研究。结果表明随着实验性AS兔动脉壁MLCK 表达的逐渐增强、活性逐渐升高，动脉内膜的通透性也逐渐增加，MLCK表达和活性的变化与动脉内膜通透性呈明显正相关；ML-7明显降低高胆固醇血症引起升高的动脉内膜通透性、减少动脉粥样硬化斑块、增加动脉壁细胞膜上的occludin含量、促进内皮细胞紧密连接蛋白发生重排而恢复正常结构。培养HUVEC培养液中加入的oxLDL可促进MLCK的表达，浓度越高促进效果越明显。Ml-7明显降低oxLDL引起的HUVEC通透性升高、明显降低ox-LDL引起的血管内皮细胞MLCK的表达和MLC磷酸化的增加、降低HUVEC的occludin表达，但增加细胞膜occludin的含量。提示高胆固醇血症增加兔动脉内皮细胞MLCK表达和活性而促进MLC的磷酸化，引起血管内皮细胞紧密连接蛋白出现明显再分布，失去正常细胞紧密连接的结构。内皮细胞向心性收缩，细胞紧密结构和功能丧失，引起内皮细胞间隙增大，导致内膜通透性增加，血液中oxLDL等通过增大的内皮细胞间隙进入动脉壁，促进AS的发生与发展。