益气温阳护卫法对哮喘大鼠Thl7细胞/Treg细胞免疫失衡的影响及作用机理研究

This research is based on the important causes of bronchial asthma - Thl7 cell / Treg cell immune imbalance, to explore the mechanism of the prevention and treatment of bronchial asthma with the method of Yiqiwenyanghuwei. In vivo study : by testing the number of asthmatic rats Thl7 cells in lung tissue ,serum and BALF, the expression levels of IL-17, STAT3, RORγ mRNA and proteins , and the levels of TGF-β, IL-6, IFN-γ, IL-2, IL-27, IL-17A, IL-17F, IL-21and IL-22 in lung tissue, to study the effect of the method of Yiqiwenyanghuwei on the differentiation and function of Thl7 cells in asthmatic rats; to provide scientific basis for prevention and treatment of asthma for the method.by testing the number of asthmatic rats CD4+CD25+Treg cells in lung tissue ,serum and BALF, the expression of Foxp3-mRNA in lung tissue,the levelsof TGF-β, IL-10 in lung tissue, to study the effect of the treatment on the differentiation and function of Treg cells in asthmatic rats. In vitro study: To investigate the effect of Yiqiwenyanghuwei drug serum interveneing the positive regulation substances of TGF-β, IL-6, STAT-3 , RORγ , IL-21, the the negative regulation substances of IFN-γ, IL-2, IL-27on the differentiation of Th17 cell, and the substances of TGF-β, Foxp3 on the differentiation of Treg cell.

本课题基于支气管哮喘发病重要原因-Thl7细胞/Treg细胞免疫失衡，拟探明益气温阳护卫法防治哮喘的作用机制，为防治哮喘提供科学依据。体内实验：检测哮喘大鼠肺组织、血清和BALF Thl7细胞数量，IL-17、STAT-3、RORγ mRNA和蛋白水平，肺组织TGF-β、IL-6、IFN-γ、IL-2、IL-27、IL-17A、IL-17F、IL-21和IL-22等水平，研究该法对Thl7细胞分化、功能影响；检测肺组织、血清和BALF CD4+CD25+Treg细胞数量，肺组织Foxp3-mRNA表达，TGF-β、IL-10水平，研究该法对Treg细胞分化、功能影响。体外实验：探讨该法含药血清干预正性调节的TGF-β、IL-6、RORγ，IL-21和负性调节的IFN-γ、IL-2、IL-27等物质对Th17分化作用；含药血清干预TGF-β、Foxp3等物质对Treg细胞分化作用。

背景：本课题基于支气管哮喘发病重要原因Thl7细胞/Treg细胞免疫失衡，拟探明益气温阳护卫法防治哮喘的作用机制。.研究内容：①体内实验：通过检测哮喘大鼠血清和 BALF Thl7 细胞数量，肺组织中TGF-β、IL-6、STAT3、RORγ、IL-17、IL-21 mRNA 和蛋白水平表达；通过检测哮喘大鼠血清和 BALF Treg 细胞数量，肺组织Foxp3、IL-10 mRNA 和蛋白水平表达，研究益气温阳护卫法对哮喘大鼠Th17、Treg细胞的分化、功能的影响。②体外实验：通过检测体外细胞液中 Thl7 、Treg细胞数量， TGF-β、IL-6、STAT3、RORγ、IL-17、IL-21 、Foxp3、IL-10 mRNA 和蛋白水平表达，研究该方药含药血清调节体外Thl7/Treg细胞失衡的机制。.结果：①体内实验：与同期对照组比较，模型组大鼠BALF及外周血中Th17细胞比例均显著升高、Treg 细胞比例均显著下降；与同期模型组比较，中、高剂量组及地塞米松组BALF及外周血中Th17细胞比例均显著下降、Treg 细胞比例均显著上升。与同期对照组比较，模型组TGF-β、IL-6、STAT3、RORγ、IL-17 、IL-21 mRNA及蛋白水平均显著上升，Foxp3、IL-10 mRNA及蛋白水平均显著降低；与同期模型组比较，中、高剂量组及地塞米松TGF-β、IL-6、STAT3、RORγ、IL-17 、IL-21 mRNA及蛋白水平均显著降低，Foxp3、IL-10 mRNA及蛋白水平均显著上升。②体外实验：与对照组比较，模型组Th17细胞比例显著上升，Treg细胞比例显著下降，与模型组比较，益气温阳护卫组及地塞米松组Th17细胞比例显著下降、Treg细胞比例显著上升；与对照组比较，模型组TGF-β、IL-6、STAT3、RORγ、IL-17 、IL-21 mRNA及蛋白水平显著升高，Foxp3、IL-10mRNA及蛋白水平显著降低；与模型组比较，益气温阳护卫组及地塞米松组TGF-β、IL-6、STAT3、RORγ、IL-17、IL-21 mRNA及蛋白水平均显著降低，Foxp3 、IL-10mRNA及蛋白水平显著上升。.结论：1.益气温阳护卫法能有效改善哮喘大鼠Thl7/Treg失衡及体外Thl7/Treg失衡。2.益气温阳护卫法治疗哮喘的机制可能