PTEN通过PI3K/Akt非依赖途径调控胶原诱导的血小板活化机制研究

Tumor suppressor gene PTEN is a member of PTEN/PI3K/Akt signal pathway, which is an important pathway regulating the signaling of multiple biologic processe. PI3K plays an important role in collage-GPVI-mediated platelet activation, yet the role of PTEN in platelet activation is rarely reported. The results from our previous experiments showed that high expression of PTEN in platelets was confirmed. We also found PTEN apparently regulates collagen-induced platelet activation through PI3K/Akt-dependent and -independent signaling pathways. Further experimentation will be needed to identify the mechanism of PTEN in platelet activation. In this study PF4-Cre (megakaryocyte PTEN-/-) mice was adopted, using a variety of platelet receptors and kinases antagonist and inhibitor to analize PTEN's role in classic platelet activation of signal transduction pathways such as PI3K/Akt, PLC/PKC and so on, including its self-regulation mechanism. Thrombus model induced by FeCl3 in PTEN knockout mice are used to study the thrombsis formation mechanism. All these results are contributed to elucidate the mechanism of PTEN in platelet activation, providing new ideas for the development of new antithrombotic drugs and clinical treatment of hrombosis and hemostasis disease .

抑癌基因PTEN是PTEN/PI3K/Akt信号通路的一员，该通路在多种生理过程中发挥作用；同时PI3K也是胶原-GPVI介导血小板活化过程中的关键因素，但PTEN在血小板中的作用鲜有报道。前期试验中，我们在国际上首次发现血小板高表达PTEN，证实PTEN是胶原引起血小板活化过程中的一个重要负性调控分子，可通过PI3K/Akt依赖和非依赖两种方式参与信号传递，但PTEN通过PI3K/AKT非依赖途径的调控机制仍未明确。本研究拟采用巨核系PTEN缺失小鼠，应用多种血小板受体和激酶拮抗剂/抑制剂，系统分析PTEN对血小板多种经典活化信号转导通路如PI3K/Akt、PLC/PKC通路等的调节作用以及其自身的受调机制；通过FeCl3诱导的血栓模型研究巨核系PTEN敲除小鼠血栓形成规律。上述研究有助于阐明PTEN调节血小板活化在血栓形成中的作用，为开发新的抗血栓药物、指导临床治疗出凝血疾病提供依据。

PTEN是重要的抑癌基因。PTEN可调控PIP3去磷酸化后生成PIP2，是PIP3信号通路的负性调控因子。PTEN也是一种酪氨酸蛋白磷酸酶。我们的前期工作报道了造血系敲除PTEN可造成胶原诱导的血小板活性增加，证实了PTEN可通过PI3K/Akt途径以及另一条尚未明确的途径调控胶原诱导的血小板活化。因此我们对这一未能明确的调控途径即PI3K/Akt非依赖途径进行了进一步的研究。我们构建了血小板特异性PTEN敲除的小鼠，体外实验结果显示，PTEN发挥生物学功能的Ser380位点磷酸化受到CK2的调节，而CK2的活化则受到PDK1的调控，在胶原诱导激活状态下，PTEN同时也与LAT的去磷酸化相关。FeCl3诱导的血栓模型结果显示PTEN缺失小鼠形成的血栓致密度高，血块收缩实验提示PTEN敲除小鼠的血小板血块收缩活性增强，但对于血小板铺展实验没有显著性影响。PTEN Ser380磷酸化在整合素αIIb3敲除小鼠中受到抑制。综上所述，我们提出了PTEN对胶原诱导的血小板活化的调控部分依赖于PI3K-PDK1-CK2-PTEN-LAT信号通路的调节，并且PTEN参与了αIIbβ3介导的外向内信号传递。