肾脏内源性 Mas 受体活化通过Smad非依赖途径调控肾间质纤维化的作用机制研究

Renin-Angiotensin System, RAS has attracted scientific attention in the regulation of Renal interstitial fibrosis (RIF). However, the role of renal endogenous MasR activation in the RIF remains unclear. Our previous results showed that after silencing MasR in renal proximal tubule (RPT) cells, both TGFβRII expression and TGFβ-mediated epithelial to mesenchymal transition (EMT) are increased, indicating that endogenous MasR activation may play an important role in inhibiting RIF. Moreover, our preliminary data shown that the treatment of RAS blocker PD123319 or the overexpression of Smads-specific E3 ubiquitin ligase Smurf could increase the stability of PJS oncogene product LKB1. However, these two processes have opposite effect on the phosphorylation of Smad2/3. Thus, we hypothesize that a Smad-independent manner must control renal interstitial fibrosis. We will perform experiments in renal MasR conditional KO mice to confirm the role of endogenous MasR activation on RIF; observe the cell phenotype change after silencing MasR in human RPT cells or primary RPT cells from MasR-/- mice. Finally, try to explore how endogenous MasR activation shifts Smad-dependent and Smad-independent manners to abolish TGFβ-induced RIF. These results may highlight potential strategies for the prevention and treatment of RIF.

肾素-血管紧张素系统在肾间质纤维化RIF中受到重视，但内源性Mas受体活化与RIF关系仍未明确。我们发现沉默近曲小管细胞（RPT）中的MasR后，TGFβRII表达升高，TGFβ促上皮细胞间充质转分化（EMT）增强，提示内源性MasR活化可能在抑制RIF中扮演了重要角色。而且，预实验还发现RAS的抑制以及TGFβ通路的重要泛素连接酶Smurf均可增加LKB1蛋白的稳定性，但二者对于Smad的调节作用相反。这提示了一定存在Smad非依赖途径来调控RIF。因此，本课题在前期研究工作基础上，以肾脏条件Mas-/-小鼠为研究对象，确证MasR敲除对RIF发生的作用；在Mas-/-小鼠原代和人RPT细胞中观察沉默MasR后EMT的改变；力求阐明内源性MasR激活是怎样通过分子开关在Smad依赖路径和非依赖路径之间进行切换，从而抑制TGFβ诱导的RIF。研究结果将为RIF的诊断和防护提供理论支撑。

目前，新型冠状病毒(SARS-CoV-2)仍在全球范围流行，但特效治疗的药物仍未发现。新冠肺炎感染的患者表现出干扰素刺激基因的低表达，这说明先天免疫抑制的潜在机制和挽救固有免疫的抗病毒反应尤为重要。本项目在2020年初经过与基金委协商，将主攻方向调整为寻找先天免疫抑制机制。. 本项目的研究发现SARS-CoV-2 核衣壳蛋白 (SARS2-NP) 的二聚化结构域是 SARS2-NP 进行液-液相分离所必需的，其抑制了 Lys63 连接的多泛素化和 MAVS 聚集，从而抑制先天抗病毒免疫反应。随后，研究发现宿主可以乙酰化SARS2-NP Lys375，并报告了 Lys375 发生的乙酰化模拟突变，这些突变都损害了 SARS2-NP 的液-液相分离，降低病毒复制能力。最重要的是，本研究筛选出一种靶向二聚化结构域的肽以破坏 SARS2-NP 液-液相分离，并证明其在体外和体内均能抑制 SARS-CoV-2 复制并拯救先天抗病毒免疫。