乙型肝炎病毒rtA181T/sW172*突变株生物学特性和在致病中的作用及机制研究

The drug resistance mutations in hepatitis B virus(HBV) can result in some changes in their biological features and pathogenicity. Our previous study showed that HBV rtA181T/sW172* mutation was not only defective in secretion of HBsAg, but also increased the level of HBV transcription and replication in hepatocytes. .In this project, with HBV promoter reporter gene system, the possible role of HBsAg truncated protein in activating HBV promoter will be investigated. Using C promoter HNF4 binding site mutant HBV, and HBV replication cell culture system and mouse model, the effect of HBsAg truncated protein in enhancing HBV transcription and replication will be classified whether related to activating HBV C promoter through HNF4. Furthermore,by observation the changes of cytopathic, hepatocarcinogenesis, HCC-related signal pathways and host proteins under the influence of HBsAg truncated protein, the possible role and molecular mechanisms of HBsAg truncated protein on HBV will be investigated..The results of this study will be beneficial for understanding the possible role and molecular mechanism of HBsAg truncated protein caused by rtA181T/sW172* mutation in enhancing HBV replication and pathogenesis to host cells.

HBV耐药突变可引起病毒生物学特性的改变，还可导致对宿主致病性的改变。我们的研究显示：HBV rtA181T/sW172*突变株所致HBsAg截短突变可引起HBsAg分泌受损，同时还增加肝细胞内HBV的转录与复制水平。.本项目拟利用HBV启动子报告基因体系，观察HBsAg截短蛋白增强HBV转录复制是否与激活HBV启动子有关；利用C启动子HNF4结合位点突变的HBV，以及HBV复制细胞和小鼠模型，观察HBsAg截短蛋白是否通过HNF4激活HBV C启动子活性，从而增强HBV转录复制。通过观察HBsAg截短突变在致细胞病变和小鼠成瘤中的作用，及对HCC发生相关信号通路和宿主蛋白的影响，了解HBsAg截短蛋白在肝癌发生中的可能作用和分子机制。.阐明HBV rtAl81T所致HBsAg截短突变在增强HBV转录复制及对细胞致病性中的分子机制,将有助于阐明HBV耐药株的致病机理。

HBV耐药突变可引起病毒生物学特性的改变及对宿主致病性的改变，我们的既往研究显示rtA181T/sW172*突变产生的截短HBsAg蛋白可引起HBsAg分泌受损。本项目进行了rtA181T/sW172*突变产生的截短HBsAg蛋白在改变HBV生物学特性以致病性中的作用及机制研究，并将其与HBV rt181T/sw172L替换突变株进行比较，还利用高通量技术寻找到了与截短型HBsAg增强HBV转录复制及致病性相关的宿主因子。项目的主要学术成果有：（１）揭示了HBV rt181T/sw172突变株表达的截短型HBsAg和替换型HBsAg对HBV生物学特性改变具有不同的调节作用，即截短型HBsAg可增强HBV复制并在肝细胞内明显蓄积，而替换型HBsAg则不具有该作用。这种改变可能与截短型HBsAg对HBV C启动子具有激活作用相关。（２）揭示出截短型HBsAg对细胞增殖有促进作用，可促进肿瘤发生发展，而替换型不具有该作用。在临床样本中也发现了HBV rt181T/sw172*是最常见的截短突变类型，对患者预后可能存在影响。（３）发现HBV rt181T/sw172突变株表达的截短型HBsAg致病性增强的机制与肿瘤发生的关键通路c-Raf-1/Erk2中重要信号因子TGFBI及其下游因子相关，芯片检测更进一步发现多条通路中的19个宿主信号因子与之可能相关，值得进一步研究。. 研究结果提示HBV rt181T/sw172*和HBV rt181T/sw172L突变株生物学特性及致病性存在较大差异，因此对于临床报告的HBV rt181T耐药突变有必要进一步区分是表达截断型HBsAg还是替换型HBsAg。同时由于HBV rtA181T突变所产生的HBsAg截短蛋白在改变HBV生物学特性和致病性中可能扮演重要角色，进一步阐明HBV rtAl81T/sWl72*耐药突变株在增强基因转录复制中的确切分子机制，将有助于阐明耐药突变株致病机制的变化，对临床HBV相关疾病的防治工作具有重要的理论和实际意义。