乙型肝炎病毒多重突变在急性肝衰竭发病中的作用及其机制的研究

Hepatitis B virus-related acute liver failure (HBV-ALF) is a critical illness with a high mortality rate. The mechanism involved includes viral factor, the host-genetic background and immune status of the host, while the potential role of viral factor in HBV-ACLF remains unidentified. On the basis of our previous research, combining the progression of the related studies, we put forward the hypothesis that viral multiple mutations may probably play an important factors in the pathogenesis of acute liver failure with a certain genetic background. We will make phenotypic assay on multiple mutations of HBV and the bioinformatic analysis of HBV quasispecies in sera of these patients. This study includes analyzing the characteristic of HBV multiple mutations，detecting virus replicability and secretion ability through transfection experiment, measuring cell apoptosis and autophagy resulting from the mutations and its mechanism in HepaRG cells, observing the changes of antigen epitopes by using MHC tetramer and epitope peptide stimulation ,and detecting the mutation induced changes of immune response in mices with different TLR2 genetic background. The study aims to explore the role of viral factors in the pathogenesis of ALF and provide a theoretical basis for decreasing the incidence of acute liver failure and optimizing the therapy to decrease mortality and improve prognosis.

乙型肝炎病毒（HBV）感染相关急性肝衰竭的死亡率极高，其发病机制与病毒学因素、宿主遗传背景和免疫状态有关，其中病毒突变在急性肝衰竭发生过程中的作用及其机制目前尚无定论。我们在前期工作的基础上，结合近年来相关研究领域的进展，提出在特定宿主遗传背景下，HBV全基因组的多重突变可能是急性肝衰竭发病的重要病毒学因素的假说，拟利用已建立的HBV突变体外表型研究平台和准种生物信息学分析平台，对可能与急性肝衰竭发生相关的HBV多重突变株进行综合生物功能学研究，包括HBV全长基因组及多重突变特点；细胞转染后检测病毒复制和分泌能力；利用HepaRG细胞观察突变株对细胞凋亡、自噬等影响及机制；采用MHC四聚体技术和表位肽刺激方法观察病毒的抗原表位变化；在不同TLR2基因遗传背景小鼠体内观察病毒突变株诱导免疫应答改变等，以研究病毒因素在急性肝衰竭发病过程中的作用及其机制，为降低肝衰竭的死亡率提供理论依据。

乙型肝炎病毒感染相关急性肝衰竭的死亡率极高，其发病机制与病毒学因素、宿主遗传背景和免疫状态有关，其中病毒突变在急性肝衰竭发生过程中的作用及其机制目前尚无定论。围绕课题目标，以暴发型急性肝衰竭和慢加急肝衰竭为重点，同时结合HBVRNA特征和准种HBV生物信息学分析，开展了以下研究：1、Toll类样受体2通路缺陷与乙型肝炎病毒初次感染后暴发型急性肝衰竭（FHB-ALF）相关性研究；2、乙肝病毒相关慢加急性肝衰竭（HBV-ACLF）患者血清核心抗体定量（qAnti-HBc）水平及与预后的关系；3、慢乙肝患者抗病毒治疗过程中血清乙肝病毒RNA水平及准种进化特征分析；4、适用于多重测序平台准种数据分析的软件包研发。结果明确了HBV多重突变在不同宿主免疫背景下对病毒复制表达的影响及其免疫炎症损伤特点，揭示了在急性肝衰竭患者TLR2通路中TIR结构域蛋白突变对相关免疫通路功能的影响。阐明了HBV-ACLF患者不同临床预后和不同并发症之间qAnti-HBc水平特点。首次阐明了核苷（酸）类似物和干扰素两种不同抗病毒药物单药治疗下血清HBVRNA水平的下降模式及抗病毒治疗早期HBV RNA的准种进化模式。利用多重测序平台准种数据分析软件包进行了大规模病毒准种测序分析。课题开展期间共发表相关论著5篇，其中SCI收录论著4篇，核心期刊论著1篇，获得计算机软件著作权1项。获得中华医学奖科技进步奖二等奖1项。举办国内会议两次，研究成果进行学术报告交流15次，其中在国际学术会议做学术报告3次。建立了慢乙肝患者血清及肝穿组织样本库。培养博士生4名，其中已毕业2名。研究结果为阐明乙型肝炎病毒感染相关肝衰竭的发病机制，降低肝衰竭死亡率提供理论依据。