基于“DVL2交叉调控Wnt与NF-κB信号通路”的艾灸治疗RA骨保护机制研究

Bone erosion is a key pathological feature of RA in advanced, delaying or even blocking RA bone erosion is one of the important target in the treatment of RA. It is well known that the imbalance of bone metabolism is a major reason for bone erosion in RA,OB/OC is a key element of bone metabolic balance,DVL cross regulation of the Wnt and NF-kB signaling pathway,and moxibustion in the treatment of RA has good anti-inflammation and bone protective effect.This study is based on the important progress for the effect of moxibustion therapy on RA,put forward a hypothesis is that moxibustion can cross regulation of Wnt and NF-kB signaling pathway by DVL,effectively rebalance of bone metabolism and promote bony remodeling in RA.This study take TCM acupuncture theory as the guidance,focusing on the key pathological is bone erosion,according to the core effect of moxibustion treatment is bone protection in RA,with DVL2 as the point, the main line is “cytokine—Wnt/NF-kB pathway—bone metabolism(OB/OC)”,using lentiviral vector,gene chip,immunohistochemistry and other modern research methods.To reveal the regulation mechanism of moxibustion in the treatment of experimental RA for cytokines,bone metabolism and signaling pathways.For this study,the important value is to deepen and rich the scientific connotation of acupuncture and moxibustion treatment on RA.

关节骨侵蚀是RA中晚期的关键病理特征，延缓甚至阻断骨侵蚀是RA 治疗的重要靶标之一。本课题在艾灸治疗RA研究取得重要进展的基础上，依据“骨代谢失衡是RA骨侵蚀的重要基础，OB/OC是骨代谢平衡的关键要素，DVL2交叉调控Wnt/NF-κB信号通路与骨代谢密切相关，艾灸治疗RA具有良好的抗炎和骨保护效应”等基本事实，提出“艾灸通过DVL2交叉调控Wnt/NF-kB信号通路，有效调节骨代谢平衡，促进RA骨重建”的研究假说，以中医针灸理论为指导，聚焦RA关键病理—骨侵蚀，围绕艾灸治疗RA目标效应—骨保护，以DVL2为研究切入点，以“细胞因子—Wnt/NF-κB信号通路—OB/OC骨代谢”为研究主线，运用慢病毒载体、基因芯片、免疫组化等方法技术，深入揭示艾灸治疗实验性RA骨保护作用的细胞因子调节、骨代谢平衡和信号通路调控机制，对于深化艾灸治疗RA的原理研究、丰富其科学内涵具有重要的价值和意义。

类风湿行关节炎（rheumatoid arthritis, RA）是最常见的炎性关节病，是一种累及多关节的慢性炎症性自身免疾病。如果RA治疗不充分可导致不可逆转的骨破坏，从而引起关节损伤和残疾，影响患者生活质量及加重患者经济负担。目前RA骨破坏并无有效的药物治疗。艾灸在临床RA和实验RA模型中均具有抗炎作用，其是否具有骨保护效应并不明确。本项目通过福氏完全佐剂造模建立新西兰兔RA疾病模型、构建DVL2过表达和干扰慢病毒、番红固绿病理、ELISA、PCR Array等方法和技术，对艾灸治疗家兔RA通过DVL2交叉调控Wnt和NF-κB信号通路以达到骨保护效应的机制进行初步探索。番红固绿染色病理检测可见艾灸能改善RA软骨结构，改良Mankin’s评分明显降低（P=0.00），HE染色可见艾灸后成骨细胞数量增多，说明艾灸在治疗RA中发挥骨保护效应。取膝关节软骨/骨行PCR Array检测发现艾灸对软骨/骨OPG/RANKL/RANK调节系统无影响，而能降低Wnt信号通路DVL2的表达。因为DVL2也能调控NF-κB信号通路，所以进一步研究艾灸对此通路的影响发现艾灸能降低IKKβ和MAP3K7的表达。取膝关节软骨/骨行PCR Array检测，艾灸组中慢病毒rLV-rabbit DVL2-mCMV-ZsGreen升高DVL2表达能部分拮抗艾灸的骨保护效应，升高MAP3K7的表达。在RA模型中慢病毒rLV-shRNA2-rabbit DVL2-2干扰DVL2表达后，能降低NF-κB信号通路MAP3K7的表达。综上所述，艾灸治疗新西兰兔RA发挥骨保护效应可能是Wnt信号通路DVL2交叉调控NF-κB 信号通路MAP3K7发挥作用。艾灸对实验性RA有着骨保护的作用，而Wnt和NF-κB信号通路可以影响细胞的生长发育、增殖、分化、迁移、凋亡、稳态维持等，后续研究可以在此基础上进一步研究艾灸骨保护效应在细胞水平上的改变。项目资助发表论文12篇，其中涉及本研究的论文6篇，培养博士研究生2名。项目投入经费57万元，支出52.938647万元，各项支出基本与预算相符，结余4.061353万元，计划用于本项目后续实验及论文发表支出。