增液汤在pSS模型中通过上调水通道蛋白发挥“增水行舟”作用的分子机制

Primary Sjogren's syndrome is a refractory chronic autoimmune disease, while it is effective to treat this disease with Zengye Decoction through syndrome differentiation. Preliminary studies indicated that Zengye Decoction suppresses the inflammation and promotes aqua porin AQP1/AQP5 expression in pSS mice model. With the application of Western blot, RT-PCR, siRNA Molecular Biology methods, and from in vivo and in vitro experiments, our research focus on the three signal pathways of TNF-α/TNFR/IKK/NF-κB , TRAF6/JNK/c-Jun, MKK/p38/c-Fos which related to the regulation of submandibular gland and colon epithelial cells aquaporin expression by Zengye Deco ction. With the experiment of separated formula, we will explore the signal transduction mechanisms and effective substance of aqua porin AQP1/AQP5 regulation of Zengye Decoction; clarify the ‘water increasing’ mechanism of Zengye Decoction promoting aquaporin expression in pSS mice model; extend the treatment range of Zengye Decoction.

原发性干燥综合征是一种较为难治的慢性自身免疫性疾病，辨证运用增液汤治疗具有良好疗效。前期研究明确了增液汤抑制pSS模型小鼠炎性改变,促进水通道蛋白AQP1/AQP5表达。本项目拟从整体动物实验及体外细胞实验层面，采用Western blot、RT-PCR、siRNA等分子生物学方法，研究增液汤对与调控颌下腺和结肠上皮细胞水通道蛋白表达相关的TNF-α/TNFR/IKK/NF-κB、TRAF6/JNK/c-Jun、MKK/p38/c-Fos三条信号转导通路的影响规律；进一步通过拆方实验研究，明确增液汤调控水通道蛋白AQP1/AQP5表达的药效物质基础和信号转导机制，阐明增液汤促进水通道蛋白表达治疗pSS模型的“增水”机制，扩展增液汤临床治疗范围。

原发性干燥综合征是一种较为难治的慢性自身免疫性疾病，辨证运用增液汤治疗具有良好疗效。前期研究明确了增液汤抑制pSS模型小鼠炎性改变,促进水通道蛋白AQP1/AQP5表达。本项目要明确增液汤调控水通道蛋白表达的信号转导过程，阐明增液汤治疗干燥综合征的“增水”机制。本项目研究有以下发现，增液汤在24小时内明显增强了TLR4的表达，从表达时间点和增强结果分析，表明这条通路完全有可能是增液汤参与免疫调节首先触动的信号环节之一,而TLRS对调节机体Th1和Th2两方面的平衡有重要意义。增液汤可以明显抑制p38及p42的表达及磷酸化,说明增液汤可抑制MAPK通路，而 MAPK会下调AQP5的表达，增液汤对其抑制可能间接促进AQP5上调，加速水液代谢。NF-κB作为早期转录因子，可在第一时间对有害细胞的刺激做出反应，实验结果显示增液汤在24小时比48小时对NF-κB p65的抑制效果更明显，且这条通路下调AQP5蛋白和RNA表达，增液汤对NF-κB p65的抑制作用，或许是其促进水通道蛋白表达的路径之一。增液汤可抑制JAK1、JAK2，JAK抑制剂主要用于血液系统疾病、类风湿性关节炎等疾病治疗。P38也可经stat关联到JAK-STAT通路，这条通路是近年来新发现的与细胞因子密切相关的细胞内信号传导通路，参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等许多重要的生物学过程。Fas是细胞表面诱导凋亡的分子,Fas系统功能发生障碍时会引起自身免疫性疾病,本项目发现增液汤对FAS有明显抑制作用，与药物浓度无关，与作用时间相关，作用时间越久，增液汤对FAS的抑制作用越明显。说明增液汤针对FAS引起的免疫类病症可以持续起效。FAS又会向下游影响到NF-κB和ERK，ERK是MAPK的重要分支，同时MAPK会下调AQP5的表达，增液汤对FAS的持续抑制，或许也是增液汤上调水通道蛋白表达的通路之一。