基于MicroRNAs调控网络研究解毒活血汤治疗III型前列腺炎的作用机制

Type Ⅲ prostatitis is a kind of autoimmune disease which is interacted by various inflammatory genes.MiRNAs regulate the response of inflammation and immune by multiple signaling network pathways.According to our previous study found differentially expressed miRNAs presented type Ⅲ prostatitis. Jieduhuoxue Tang has certain effect in the treatment of type Ⅲ prostatitic.It can adjust the levels of cytokines'expression in prostatic tissue effectively. This study uses miRNA chip technology 、RT-PCR technology 、Northern blot to test miRNAs'expression in prostate tissue of type Ⅲ prostatitis rat model,in order to filter out specific miRNA.And conbining with bioinformatics methods to functional enrichment analysis the target messenger genes of specific miRNA,to get miRNA target genes and gene function regulatory networks.At the same time,we observe the intervention effect of Jieduhuoxue Tang on their expression ,explorating the key mechanism of Chinese medicine treatment for type Ⅲ prostatitis , providing theoretical and experimental evidence for the treament and prevention of Chinese medicine for prostatitis.

Ⅲ型前列腺炎是由多种炎性基因共同作用的自身免疫性疾病。miRNAs可通过调控多个信号网络通路对炎症反应和免疫反应起重要调节作用。我们前期研究发现miRNAs在Ⅲ型前列腺炎中呈现差异性表达，解毒活血汤治疗Ⅲ型前列腺炎疗效显著，能有效调节前列腺组织中细胞因子水平。 本课题以我院有效治疗Ⅲ型前列腺炎的解毒活血汤为研究对象，运用miRNA芯片技术、RT-PCR技术、Northern blot技术检测miRNAs在Ⅲ型前列腺炎大鼠前列腺组织中的表达情况，筛选出特异性miRNA，并结合生物信息学方法对特异性miRNA靶信使基因进行功能富集分析，获得miRNA靶基因和基因功能调控网络。同时研究解毒活血汤对它们表达的干预作用，探讨解毒活血汤治疗Ⅲ型前列腺炎的关键作用机制，为中医药防治前列腺炎提供理论和实验依据。

本项目通过miRNA高通量芯片技术检测正常大鼠和Ⅲ型前列腺炎大鼠前列腺组织中miRNAs的表达情况，获得了Ⅲ型前列腺炎miRNA表达谱。研究结果显示相对于正常对照组，III型前列腺炎模型组中共有495个miRNA表达量发生了变化，其中有显著差异的miRNA有211个，与前列腺疾病相关的有37个。运用qRT-PCR技术和Northern blot技术对其中四个重要的miRNA（miR-146a、miR-96、miR-423和miR-205）进行验证，结果与测序结果趋势一致。同时运用生物信息学方法对差异性miRNA靶基因进行功能富集分析，获得miRNA靶基因和基因功能调控网络，结果显示靶基因主要通过调控NF-κB、N-Glycan、Oxytocin s、Hippo、 mTOR、FoxO等涉及细胞增殖、自噬、免疫调节等重要的生物学功能的信号通路发挥作用。同时，研究了解毒活血汤对Ⅲ型前列腺炎大鼠前列腺中差异性miRNAs的干预作用以及对重要炎性信号通路NF-κB信号通路的干预作用，结果显示解毒活血汤高剂量组能够明显降低miR-146a，miR-423，miR-205的表达，提高miR-96的表达，抑制NF-кB P50、NF-κB P65的表达，提高Iκ-Bα的表达。.通过本项目，我们获得了Ⅲ型前列腺炎大鼠前列腺中的miRNAs表达谱及差异性miRNAs表达情况，初步探讨了差异性miRNAs及其靶基因和基因功能调控网络在Ⅲ型前列腺炎发病机制中的可能作用。初步探讨了解毒活血汤对Ⅲ型前列腺炎大鼠前列腺中特异性miRNA及其靶基因和基因功能调控网络的干预作用，有助于进一步阐明了中药治疗Ⅲ型前列腺炎的关键作用机制，达到了预期研究目标。