β2糖蛋白I介导乙型肝炎病毒活化肝癌细胞核因子kB的研究

β2糖蛋白I（β2GPI）是由肝脏产生血浆中含量较为丰富的糖蛋白。课题组验证了乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）可以与β2GPI结合，并首次发现肝癌细胞株SMMC-7721的细胞膜上存在与β2GPI特异性结合的蛋白Annexin II。前期工作中发现HBsAg与β2GPI结合能诱发肝癌细胞中核因子kB（NF-kB）较强的活化，下游甲胎蛋白显著分泌，二者联合通过IkK-IkB-NF-kB信号传导通路活化NF-kB。本项目拟在前期工作的基础上，进一步深入探讨协助Annexin II完成跨膜信号传导的衔接蛋白以及活化NF-kB的上游信号传导通路。这一研究是前期工作的进一步延伸，即明确参与HBsAg-β2GPI-AnnexinII-？-NF-kB的信号传导通路，为阐明乙肝后肝癌的发生提供新的理论基础。

β2糖蛋白I是血浆中较为丰富的一种糖蛋白，大多数研究都集中在其作为自身抗原在抗心磷脂综合征中的作用。我们前期实验发现，β2糖蛋白I联合乙肝表面抗原可以激活肝癌细胞中核因子kb。本研究对这一信号通路进行了研究。实验通过基因沉默的方法，干扰沉默了TLR2、TLR4以及MyD88蛋白，研究是否二者联合激活NF-κB依赖TLR2/TLR4-MyD88的途径。利用基因工程的方法建立并筛选出高效的干扰片段siRNA。实验分为五组，分别为空白对照组，阳性对照组，TLR4干扰组，TLR2干扰组，MyD88干扰组。其中，阳性对照组为HBsAg蛋白孵育及beta2GPI质粒转染肝癌细胞，干扰组为在阳性对照组的基础上转染干扰片段。利用RealtimePCR及WB检测被干扰蛋白的表达情况，ELISA检测下游因子AFP、TNF-α、IL-1β的表达，并采用EMSA的方法检测 NF-κB的表达情况。结果表明，干扰片段降低了相关蛋白的表达，被干扰组的下游因子表达均较阳性对照组显著下降。NF-κB的激活也在三组干扰组中显著下降，但TLR4干扰组下降更为明显，同时MyD88干扰组也明显下降。结论，β2糖蛋白I联合乙肝表面抗原激活肝癌细胞中核因子kb的信号传导可能是通过TLR4作为衔接蛋白，依赖MyD88途径进行的。