去细胞异体神经支架复合自体ADSCs及外源性SDNF修复周围神经缺损

Peripheral nerve repair is one of the challenges of clinical practice. Autografts are recognized as the gold standard for nerve grafting. However,available nerve sources for autologous transplantation are limited.Stem cells offer promise for peripheral nerve repair and regeneration because they can differentiate into several tissues cells including Schwann cell. However, The current lack of Schwann cell phenotype，high cost and major trauma limit the application in the differentiation of stem cells to Schwann cell. Our previous study showed no obvious immune rejections were observed among the chemically extracted acellular nerve allografts. The purpose of this study are thus to begin to investigate the ability of differentiation toward Schwann cell phenotype of adipose derived stem cells by treated with schwann cell derived neurotrophic factor in vitro and the effection of peripheral nerve regeneration in vivo. We are trying to restore the morphological structure of the damaged nerve, promote functional recovery, as well as provide evidence for the application of the tissue-engineered peripheral nerve in clinical science.

周围神经损伤发病率日趋增加，给国家、社会及家庭带来了沉重的经济负担。周围神经缺损的修复也是临床中面对的最棘手问题之一。自体神经移植作为临床治疗的金标准，受到供体来源不足等诸多因素的限制。干细胞修复神经缺损已经成为基础研究的重点。然而干细胞与目的细胞共培养的方式相对费时费力、创伤大、花费高，并存在分化后的目的细胞数量少与表型难确定等不足。本项目拟在体外利用许旺细胞源性神经营养因子对无免疫原性的化学去细胞异体神经支架与脂肪干细胞的复合体进行诱导分化，评价脂肪干细胞向类许旺细胞分化的效能优劣；并利用体外构建的组织工程神经移植到体内修复犬坐骨神经缺损，评价构建的组织工程神经的修复能力；在保持组织工程神经形态连续性以促进功能恢复的同时，发挥"多快好省"的特点来满足临床治疗需要，解除创伤患者痛苦，为国家节省医疗卫生开支。

周围神经损伤发病率日趋增加，给国家、社会及家庭带来了沉重的经济负担。自体神经移植受到供体来源不足等诸多因素的限制。干细胞与目的细胞共培养的方式相对费时费力、创伤大、花费高，存在分化后的目的细胞数量少与表型难确定等不足。.本项目主要研究内容为利用许旺细胞源性神经营养因子对化学去细胞异体神经支架与脂肪干细胞的复合体进行诱导分化，评价脂肪干细胞向类许旺细胞分化的效能优劣；利用体外构建的组织工程神经移植到体内修复犬坐骨神经缺损，评价构建的组织工程神经的修复能力；.针对以上研究内容，本项目研究取得了重要结及体内、外重要数据：1.制备的去细胞异体神经支架完全符合计划中组织工程支架的要求，无免疫原性。2. 在体外实验中，对种子细胞ADSCs进行了培养，培养及鉴定过程顺利，利用外源性的SDNF，在体外完成了支架、种子细胞及细胞因子的复合。通过实验，确定了复合诱导液中SDNF浓度100ng/ml这一诱导ADSCs分化的最佳合理量能。3.通过HE、及S-100等免疫组化染色的对比， Real-timePCR检测S-100基因表达等手段，SDNF诱导ADSCs向类许旺细胞分化的能力明显，其中S-100免疫组化染色图片基本可达到SCs的效果，SDNF诱导ADSCs组的Real-timePCR检测S-100基因表达数据明显高于单纯的去细胞神经组及未经SDNF诱导的干细胞神经组，有明显的统计学差异。4. 体内动物实验在术后不同时间点利用电生理检测组织工程周围神经的生物学活性及神经修复的效果。SDNF诱导ADSCs组织工程神经组的修复效果明显好于单纯的去细胞神经组及未经SDNF诱导的干细胞神经组。.本项目完成的主要科学意义在于保持组织工程神经形态连续性以促进功能恢复的同时，发挥了作为研究目标的组织工程神经“多快好省”的特点来满足临床治疗需要，解除创伤患者痛苦，为国家节省医疗卫生开支。