艾灸延缓衰老及对CD4+T细胞表观遗传修饰调节作用的研究

Immune aging is a gradually decline process of immune function along with the age. Immune aging is the important factors for increasing morbidity and death rate after infectious diseases, cancer, autoimmune diseases. Maintain immune steady state is a key to prevent immune aging. Immune steady state is to be greattly controlled by CD4 + T cell function. The latest research shows that IL-2 is the key factor for regulating CD4 + T cell differentiation. Subacute aging rats model were established by injection with D-gal solution. Points Shenshu (BL 23) were treated with moxibustion in treatment group. Flow cytometry (FCT) , immunohistochemistry(IHC), ELISA,real time PCR, Confocal laser was used for detecting the change of CD28、IL-2、IL-2Rα、NF-κB、sjTRECs 、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、HATs、HDACs and CD4 + T cell activation and differentiation. Studying the changes of immune steady-state imbalances in aging rats and disscusing the regulating actions of shenshu point by moxibustion. Comprehensive evaluation moxibustion actions for delaying senescence, reconstructing of the immune steady-state. Discusses the related cell and molecular echanism, and provides new evidence for delaying senescence by moxibustion.

免疫功能随年龄增长逐步减退，免疫衰老是老年个体感染性疾病、肿瘤、自身免疫性疾病等患病率、死亡率增高的重要因素，维持免疫稳态平衡是防止免疫衰老的关键。免疫稳态在很大程度上受CD4+T细胞功能调控，最新研究表明IL-2是调控CD4+T细胞分化平衡状态的关键因子之一。故本研究以D-半乳糖造亚急性衰老大鼠模型，从表观遗传修饰角度，以流式细胞术、免疫组化、ELISA、实时定量PCR、MSP、ChIP、Co-IP、激光共聚焦等技术观察艾灸肾俞穴对衰老模型大鼠体内CD28、IL-2、IL-2Rα、NF-κB、sjTRECs 、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、HATs、HDACs等相关基因、蛋白、转录的调控及对CD4+T细胞活化和分化的机制的影响，研究衰老大鼠免疫稳态失衡变化及艾灸肾俞穴对衰老性变化和相关基因表观遗传修饰的调节作用，综合评价艾灸延缓衰老效应并探讨相关机制。

本项目观察艾灸肾俞穴延缓亚急性模型大鼠衰老及对免疫细胞分化调控中的关键因子IL-2 基因表观遗传修饰和转录信号通路的影响。IL-2主要是由T细胞在受到抗原或丝裂原刺激后合成分泌，是一种具有多种生物学功能的细胞因子，在调节机体免疫功能中起着非常重要的作用。本研究表明，与正常组大鼠比较，D-半乳糖所致的亚急性衰老模型大鼠血清皮质酮含量升高，胸腺糖皮质激素受体表达降低，脾脏CD3+T、CD4+T、CD8+T细胞含量降低，胸腺CD4+T细胞IL-2、IL-2Rα、NF-κB、I-κB、DNMT3a、HAT1、HDAC2蛋白表达量均下降，DNMT1、DNMT3b表达量均升高，亚急性衰老大鼠胸腺CD4+T细胞IL-2、IL-2Rα、NF-κB、HAT1、HDAC2 mRNA表达减少，DNMT1 mRNA表达升高，胸腺 CD4+T 细胞中 IL-2 基因启动子Set1区域的DNA甲基化水平、组蛋白H3乙酰化水平、MeCP2水平升高；而艾灸组大鼠血清皮质酮含量较模型组降低，胸腺糖皮质激素受体表达升高、脾脏CD4+T细胞含量升高，胸腺CD4+T细胞IL-2、IL-2Rα、NF-κB、I-κB、HAT1、HDAC2蛋白表达量较模型组明显升高；艾灸肾俞穴并可上调亚急性衰老大鼠胸腺CD4+T细胞IL-2、IL-2Rα、NF-κB、HAT1、HDAC2 mRNA表达，下调DNMT1 mRNA表达，下调胸腺 CD4+T 细胞中 IL-2 基因启动子Set1区域的DNA甲基化水平、组蛋白H3乙酰化水平、MeCP2水平；模型组大鼠胸腺CD4+T细胞中NF-κB在胞浆中较少，少量位于细胞膜上，I-κB大多存在于胞膜上，且与NF-Κb的位置重叠较多；艾灸后，胸腺CD4+T细胞中NF-κB在胞浆中较多，I-κB在细胞浆和细胞膜上均较少；说明艾灸可能是通过降低血清中的皮质酮含量，减少胸腺淋巴细胞中GC-R复合物的形成，降低其与NF-κB的结合几率，促进NF-κB向胞内转移，提高转录活性，上调IL-2基因的表达，使淋巴细胞激活，IL-2R的表达增多，调节其表观遗传修饰作用。