养肺活血方干预Notch通路介导的肺成纤维细胞表型转化在肺纤维化中的作用机制研究

Pulmonary fibrosis(PF) is a speial form of the chronic lung fibrosis .It is the result of the body's self- repair after lung injury and a common outcome of a variety of lung diseases. The process from lung fibroblast to myofibroblast is so improtant in PF. Yangfei Huoxue Prescription is composed of drugs for supplementing Qi and nourishing Yin,whose mechanism relates to reduce the expression of TGF-β、α-SMA in lung to repress lung fibroblast to myofibroblast. This effect is relate to Notch signaling pathway.. In our study, we will study from the Notch signaling pathway of PF in lung fibroblast. Then we will study the role of Notch signaling pathway in process of lung fibroblast phenotype transformation, and Intervention effect of Yangfei Huoxue Prescription, using immunofluorescence, Luciferase assay, transfection, RNA interference and other technologies

肺纤维化是一种慢性肺部纤维化疾病的一种特殊形式，是肺损伤后人体自身修复的结果，是多种肺部疾病的共同结局，而肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化是肺纤维化形成的中心环节。养肺活血方由益气养阴药和活血通络药组成，前期研究表明其改善肺纤维化与减少肺组织TGF-β、α-SMA的表达相关，而TGF-β为形成肺纤维化的关键因子，α-SMA则为肌成纤维细胞的标志性蛋白，且相关的预实验表明其与Notch信号通路相关。因此，本研究将以Notch信号通路为切入点，围绕肺纤维化过程中肺成纤维细胞表型转化，采用免疫荧光、转染、RNA干扰等多种技术，从整体和离体两个方面，通过检测Notch信号通路的相关蛋白，及成纤维细胞的蛋白表达及功能的改变，探讨养肺活血方在肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化过程中的作用。

肺纤维化是一种慢性肺部纤维化疾病的一种特殊形式，是肺损伤后人体自身修复的结果，是多种肺部疾病的共同结局，而肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化是肺纤维化形成的中心环节。养肺活血方由益气养阴药和活血通络药组成，前期研究表明其改善肺纤维化与减少肺组织TGF-β、α-SMA的表达相关，而TGF-β为形成肺纤维化的关键因子，α-SMA则为肌成纤维细胞的标志性蛋白。因此，本研究以Notch信号通路为切入点，围绕肺纤维化过程中肺成纤维细胞表型转化，采用免疫荧光、转染、免疫共沉淀等多种技术，从整体和离体两个方面，通过检测Notch信号通路的相关蛋白，及成纤维细胞的蛋白表达及功能的改变，探讨养肺活血方在肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化过程中的作用。实验结果表明，首先，养肺活血方通过抑制博来霉素致大鼠肺纤维化模型肺组织Notch信号通路相关蛋白的表达，抑制α-SMA的表达减少胶原的沉积改善肺间质的纤维化程度，而这种作用与抑制TGF-β1的表达相关。其次，在细胞水平，采用TGF-β1诱导的肌成纤维细胞转化模型，给予养肺活血方的含药血清后发现养肺活血方可以同样抑制Notch1、Notch3及其他通路相关蛋白表达，并且抑制α-SMA及COLⅠ的表达，同时抑制成纤维细胞的收缩功能，提示养肺活血方抑制成纤维细胞的表型转化，而这种作用与Notch1及Notch3相关。最后，采用慢病毒转染的方法使肺成纤维细胞高表达NICD1及NICD3，给予养肺活血方后，成纤维细胞α-SMA及COLⅠ的表达显著降低，胶原收缩反应有所缓解。本研究提示养肺活血方具有抑制成纤维细胞表型转化的作用，而这种作用与抑制Notch1、Notch3密切相关，并最终抑制胶原的沉积从而改善肺纤维化程度。本研究为肺纤维化的中医临床治疗提供了重要的理论指导和可靠的实验室依据，为进一步的新药开发奠定了良好基础。