miR146a在肺成纤维细胞表型转化中的作用和机制

Pulmonary fibrosis is a serious disease.While the mechanism is still in searching.It has been reported that pulmonary fibrosis of sjogren syndrome could be relieved when transormation of fibrosis is inhibited.And the juncture of the trasormation are the signal transduction of NF-κB and AP-1.When we stop these signal trastuction,the transformation of fibroblast is affected. In the previous study, we found that miR146a is the key gene in NF-κB pathway,it can accuse the pathway by control the expression of its target protein of TRAF6 and PI3K. Therefore, we put forward assumption: miR146a may be the key signal of phenotype transormation of fibrosis,by up-regulation of miR146a we can inhibit of transformation in vivo. To prove this hypothesis, we will culture fibroblast of pulmonary in vito,and observe the change of conversion of the fibroblast transformation when the expression of miR146a has been decreased or increased by RNA interference.It can offer theory support for the mechanism and therapy of pulmonary fibrosis of sjogren syndrome.

肺纤维化是严重危害人类健康的疾病，目前机制仍未能明确。资料表明抑制成纤维细胞转化为肌成纤维细胞可达到缓解干燥综合征肺纤维化的目的。NF-κB 及AP-1信号转导是成纤维细胞表型转化的关键，阻断NF-κB 及AP-1信号转导可以影响成纤维细胞表型转化。在前期研究中，我们发现miR146a可影响其靶蛋白TRAF6及PI3K的表达从而调控NF-κB信号转导通路。因此我们提出假设：miR146a可能是影响肺成纤维细胞表型转化的关键信号，上调miR-146a可抑制成纤维细胞的表型转化。为证实这一假说，我们将观察通过RNA干扰技术减少或增强miR146a表达后，体外培养的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化率的变化，为进一步探讨干燥综合征肺纤维的发生机制和防治提供理论支持。

肺纤维化的治疗是世界难题，目前尚无特效药可用。因此对其发病机制进行研究以期可以发现新的治疗靶点有重要意义。肌成纤维细胞公认是所有致纤维化的效应细胞，其表型转化是纤维化的关键步骤和核心环节。NF-κB 及AP-1信号转导是成纤维细胞表型转化的关键，在前期研究中，我们发现miR146a可影响其靶蛋白TRAF6及PI3K的表达从而调控NF-κB信号转导通路。但对于纤维化的影响目前尚无研究。因此我们提出假设：miR146a可能是影响肺成纤维细胞表型转化的关键信号，上调miR-146a可抑制成纤维细胞的表型转化。为证实这一假说，我们将观察通过RNA干扰技术减少或增强miR146a表达后，体外培养的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化率的变化，为进一步探讨肺纤维化的发生机制和防治提供理论支持。本课题中，我们成功建立了博来霉素诱导肺纤维化小鼠模型，在肺纤维化小鼠模型中观察到随着肺纤维化程度增加，a-SMA表达也增加，miR-146a的表达随之减少，说明miR-146a与肺纤维化呈负相关。由模型组培养出的成纤维细胞中，过表达miR-146后，其细胞增殖受到抑制，TGF-β1、IκBα蛋白相对表达量均降低，NF-κB p65蛋白相对表达量增高。说明过表达miR-146a后，抑制了NF-κB向细胞核内转移，而停留在胞质中，胞质中有IκBα与其结合，导致TGF-β1的转录受抑制，从而分泌减少，影响肺成纤维细胞的增殖与分化。在野生型小鼠成纤维细胞的实验中发现，在TGF-β1浓度为10ug/L时，a-SMA蛋白、胶原表达量较低剂量明显增高，miR-146a的表达抑制最明显。在干预miR-146a表达后，TGF-β1的诱导表型转化程度也发生了变化，抑制miR-146a的表达后，成纤维细胞的增殖增加，凋亡减少，a-SMA、 I型胶原及III型胶原表达也出现明显增加，TRAF6的表达增加，说明干预miR-146a可以调控成纤维细胞的表型转换。本课题证实miR-146a可以通过干预NF-ΚB信号通路及TRAF6的表达从而影响肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞，为肺纤维化的机制研究及治疗提示理论基础。