蛋白质天然态多构象与折叠自由能的关系研究

研究稳定蛋白质天然构象的热力学性质，是了解蛋白质天然构象形成的关键。以往的大多数关于蛋白质热力学性质的理论和实验研究集中在各种弱相互作用引起折叠焓变化对折叠自由能的贡献，而很少考虑折叠熵变对折叠自由能的贡献，试验测得各种因素对自由能贡献在正负1kJ/mol左右。通过pH滴定，我们发现天然蛋白Ssh10b单体中有7-8个碱性残基在pH4-9可被中和，说明它们的pKa值在天然蛋白质中向低端移动。由于酸碱平衡，天然蛋白质将不是单一构象，而是一个构象系宗。理论计算表明：由天然态多构象贡献稳定自由能30kJ/mol。本项目用NMR方法测量Ssh10b中可滴定残基pKa值，研究蛋白质天然态多构象对折叠自由能贡献，并通过实验测定P18A和P62A突变体折叠自由能，证实理论计算蛋白质天然态构象熵的可靠性。