miRNA-155调控Th17/Treg平衡在口腔慢性移植物抗宿主病中的作用及机制研究

Oral chronic graft-versus-host disease (cGVHD) is a major complication of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT)，manifests as an inflammatory and autoimmune-like disorder characterized by lichen planus-like changes on the oral mucosa which is its diagnostic features. The occurrence and progress of oral cGVHD may be related to the imbalance of Th17/Treg. MicroRNA(miRNA) is a class of small noncoding RNA which plays a role in immune cell differentiation and involves in many autoimmune diseases like scleroderma and oral lichen planus. Aimed to explore the role of miRNA-155 in the Th17/Treg balance in oral cGVHD, as well as to understand the mechanism involved, we detect the miRNA-155 differential expression in peripheral blood and oral exfoliative cells among patients with oral cGVHD after allo-HSCT, and Th17 and Treg cells differentiation and cytokines production. Further, cGVHD mice model is established to observe the effect of miRNA-155 on the balance of Th17/Treg，as well as the activation of JAK-STAT and TGF-β/Smad signal pathway by over-expression and inhibition of miRNA-155 .

口腔慢性移植物抗宿主病（cGVHD）是异基因造血干细胞移植术后常见并发症之一，是以口腔粘膜苔藓样变为诊断性特征的类似自身免疫性疾病，其发生发展可能与患者Th17/Treg失衡相关。微RNA（miRNA）在免疫细胞的发育和成熟中发挥重要作用，并具有组织特异性。已证实miRNA-155与硬皮病、扁平苔藓等多种免疫疾病有关。本项目拟通过检测miRNA-155在allo-HSCT后口腔cGVHD患者血液和口腔病损中的表达，结合Th17/Treg细胞免疫平衡状况，探讨miRNA-155对口腔cGVHD发生发展的影响及其可能的调控机制；此外，构建小鼠cGVHD模型，通过miRNA-155干预试验，探讨miRNA-155对Th17/Treg细胞免疫的影响及JAK-STAT及TGF-β/Smad信号通路在其中的作用。本项目旨在进一步理解口腔cGVHD的疾病机制，为其临床防治提供新的思路。

口腔慢性移植物抗宿主病（cGVHD）是异基因造血干细胞移植术后常见并发症之一，是以口腔黏膜苔藓样变为诊断性特征并合并多种口腔表征的类自身免疫性疾病，是一种口腔黏膜潜在恶性病变。目前，临床上对该疾病的风险因素、发病机理、癌变原因、治疗方式和预防对策均认识有限。微RNA（miRNA）参与人体多种生理环节，并具有组织特异性。已证实与硬皮病、扁平苔藓等多种免疫疾病有关。本项目通过病例对照研究，对口腔cGVHD的疾病特点进行观察分析，发现口腔cGVHD常发生于移植后300天内且临床表现多样，但目前尚未发现尚未发现患者性别、预处理方案ATG使用情况等患者性别、女供男移植、移植物来源、回输单个核细胞数等临床指标与口腔cGVHD的发生存在相关性。通过流式细胞技术发现，口腔cGVHD患者外周血存在Th17/Treg比值增大、CD4/CD8与M1/M2的比值减少现象。通过miRNA高通量测序与qPCR技术，结合生物信息学分析，发现口腔cGVHD、非口腔cGVHD、健康对照之间外周血循环miRNA存在差异性表达。miRNA可能通过影响PI3K-Akt、TGF-β/Smads等信号通路参与口腔cGVHD的发生，miRNA-769-5p、miRNA-92a-3p等在口腔cGVHD诊断上具有一定价值。结合上述研究结果，利用iRNA以及慢病毒转染技术进行分析细胞实验，hsa-miR-92a-3p可能通过沉默PTEN，抑制PTEN/PI3K/Akt通路，促进T细胞IL-17表达和抑制Foxp3表达，从而引起口腔cGVHD的发生。hsa-miR-769-5p可能通过沉默Smad2，抑制TGF-β/Smads通路，降低M2型巨噬细胞比例，减轻口腔cGVHD的发生。项目还通过hPBMCs注射法成功建立伴发口腔病变的cGVHD小鼠模型，并对其口腔病损的组织学特点进行详细阐述。针对研究中发现口腔cGVHD患者外周血PD-1和PD-L1表达升高现象，结合生物信息学发现PD-L1介导的免疫逃避可能与巨噬细胞浸润有关，导致上皮间质转化进展，促进癌症转化，提示了口腔cGVHD癌变的可能原因。综上，本项目进一步揭示了口腔cGVHD发生发展的机制，为其临床防治提供有效证据。