基于miR-27a调控P53/EGFR/STAT3信号通路探讨加味芍药甘草汤对子宫腺肌病的干预机制

Life quality of people with adenomyosis has been compromised by progressive dysmenorrheal and infertility.Effective therapy is still lacked. Our precious studies have discovered that severity of symptoms is related with abnormal proliferation, invasion and apoptosis of focal cells. P53/EGFR/STAT3 signal pathway regulated by miR-27a plays an important role in regulating cell proliferation and apoptosis.This study is to observe cell proliferation, cycle distribution, apoptosis rate and migration of cell by cell culture and BALB/c mice after intervention with Jiawei Shaoyaogancao decoction. We intend to reveal the possible mechanism of P53/EGFR/STAT3 signal pathway in adenomyosis after intervention with Jiawei Shaoyaogancao decoction by means of Western blot,RT-qPCR and flow cytometry, which would provide evidence and new research strategy to new drugs for adenomyosis.

子宫腺肌病的渐进性痛经、不孕等临床症状严重影响患者的生存质量，目前尚缺少有效的治疗方法。我们前期研究发现病灶细胞的异常增殖、侵袭和凋亡与其发病密切相关，而miR-27a调控的P53/EGFR/STAT3信号通路在细胞凋亡、增殖中起重要作用。本课题拟通过细胞和动物实验，运用蛋白免疫印迹、RT-qPCR、流式细胞技术等方法观察药物干预后细胞增殖、凋亡、迁移能力的改变及信号通路相关因子的变化, 探讨加味芍药甘草汤对子宫腺肌病miR-27a调控的P53/EGFR/STAT3信号通路的干预机制，为子宫腺肌病的新药研发提供实验依据和新的研究思路。

子宫腺肌病严重影响广大女性正常生活和工作，西药治疗的副作用、症状反复及手术创伤成为西医治疗的瓶颈，中医药治疗的优势日益凸显。本课题以免疫化学法鉴定所培养的原代细胞；MTT法和流式细胞技术检测细胞的增殖情况、细胞周期分布和凋亡率；划痕实验以检测细胞的体外迁移能力；蛋白免疫印迹法检测细胞中p53-273H、LIF、EGFR、p-EGFR、c-Src、STAT3、p-STAT3、COX-2的表达；RT-qPCR技术检测细胞中p53-273H mRNA、LIFR mRNA、miR-27a、EGFR mRNA的表达；并通过观察加味芍药甘草汤影响下miR-27a对裸鼠病灶组织中P53/EGFR/STAT3信号通路相关因子的调控作用，以期阐明加味芍药甘草汤治疗子宫腺肌病的深层作用机理，对深入了解子宫腺肌病的病因病理，指导临床辨证用药，为子宫腺肌病新药研发提供科学依据。结果发现：1. 加味芍药甘草汤通过上调miR-27a，抑制了EGFR mRNA和p53-273H mRNA的表达，从而降低了P53/EGFR/STAT3信号通路中p53-273H、LIF、c-Src、EGFR、p-EGFR、STAT3、p-STAT3、COX-2等蛋白的含量，抑制了子宫腺肌细胞的增殖、促进其凋亡，并降低了细胞的迁移率。 2.加味芍药甘草汤能够有效缩小人来源型子宫腺肌病裸鼠模型腹腔内病灶组织的体积，并且降低病灶组织内P53、EGFR、P-EGRG、STAT3、P-STAT3、COX-2蛋白的表达，能够抑制子宫腺肌病细胞的增殖，减少病灶组织内血管的新生。因此，临床运用加味芍药甘草汤治疗子宫腺肌病可以限制或延缓子宫腺肌病的发展和侵袭。3. 加味芍药甘草汤各剂量组对于miR-27a均有上调作用，对P53/EGFR/STAT3通路中各基因及蛋白均具有抑制作用。加味芍药甘草汤作为一个多靶点的复方汤剂，其复杂的药效机制对于多个基因及蛋白的表达均有影响，本研究为进一步研发加味芍药甘草汤提供了一定的理论基础和科学依据。