家蝇cDNA库的构建研究

家蝇幼虫经注射培养的大肠杆菌后24小时，将幼虫匀浆离心提取上清液，溶菌和抑菌实验证明提取物对微球菌、绿浓杆菌和大肠杆菌等致病菌有抑菌活性，DSS-PAGE显示有蛋白类物质生成，分子在小较溶菌酶小。同法诱导抗菌基因表达，提取总RNA并纯化mRNA，经逆转录合成cDNA双链，与相应内切酶消化的噬菌体DNA双臂连接，用含细胞溶素原的噬菌体包装蛋白包装后感染宿主菌Y1090(γ-)，重组噬菌体释出后用SM液收集。经测定，滴度为10(-)pfu/ml,Xgal和IPTG平板显示重组率为80%。部分文库以扩增后的产物保存，另一部分未经扩增。由于昆虫抗菌蛋白在抗菌抗肿瘤细胞上有潜在的应用价值，适当时将进行家蝇抗菌蛋白cDNA的筛选分离，为表达和转基因研究做准备。