凋亡抑制蛋白c-FLIP促进肝癌细胞葡萄糖摄取和细胞增殖及其机制研究

肝癌进展迅速，耗能增加，需要更多的葡萄糖等能量物质，干扰癌细胞葡萄糖摄取从而阻断癌细胞继续增殖是肝癌治疗的新方向。c-FLIP是一种凋亡抑制蛋白，其在肝癌等多种恶性肿瘤中高表达。我们的前期研究结果显示：c-FLIP在不同分化肝癌组织中的表达有明显差异，组织分化程度越低其阳性表达率越高；c-FLIP可以与葡萄糖被动转运蛋白GLUT1相互作用，并促进肝癌细胞摄取葡萄糖。上述研究结果提示：c-FLIP可能通过调节GLUT1，影响肝癌细胞对葡萄糖的转运，进而影响肝癌细胞增殖等恶性生物学行为，但具体分子机制有待深入研究。本课题拟综合利用分子生物学、细胞生物学和影像学实验方法，分析c-FLIP调控GLUT1的详细作用机制以及干扰二者的相互作用能否阻断肝癌细胞继续增殖，从而"饿死"癌细胞。为葡萄糖代谢异常在肝癌发展中的作用和分子机制提出新的认识，为肝癌的治疗提供新的思路。

Cellular-FLICE inhibitory protein(c-FLIP)是近年来发现的一类含有死亡效应结构域的凋亡抑制蛋白，在蛋白水平，c-FLIP主要存在三种亚型，c-FLIPL，c-FLIPS 和c-FLIPR。c-FLIP对细胞凋亡，自噬，坏死等发挥重要的作用。已证实 c-FLIP 与炎症、肿瘤、自身免疫性疾病的发生发展有关， c-FLIP在肝癌中高表达，且与肝癌的预后负相关。在本课题中，我们发现：第一、c-FLIP通过调节肝癌细胞葡萄糖吸收促进肝癌细胞糖酵解；第二、c-FLIP促进肝癌细胞在低糖条件下存活；第三、c-FLIP抑制低糖诱导肝癌细胞的自噬水平。. 首先，我们利用seahorse XF analyzer能量代谢实时监测仪，分析发现c-FLIPL促进肝癌细胞葡萄糖酵解 。进一步研究发现，c-FLIPL促进肝癌细胞葡萄糖摄取，从而促进肝癌细胞葡萄糖酵解。我们在动物模型中，利用PET-CT同样证实，c-FLIPL促进肝癌葡萄糖摄取。为了探讨c-FLIPL促进肝癌细胞葡萄糖代谢机制，我们分析c-FLIPL对细胞葡萄糖转运体的表达和稳定性的影响，证实c-FLIPL稳定细胞葡萄糖转运体SGLT1蛋白，进一步利用免疫共沉淀技术及免疫荧光实验证实，c-FLIPL通过与葡萄糖转运体SGLT1相互作用，抑制葡萄糖转运体SGLT1泛素化降解，促进SGLT1膜转位，从而促进细胞葡萄糖吸收。. 我们还发现，不同的肝癌细胞对低糖的耐受是不同的，为了论证c-FLIPL对肝癌细胞葡萄糖吸收在肿瘤增殖中的意义，我们选取对低糖耐受的肝癌细胞，分别干涉c-FLIPL及SGLT1表达，利用流式细胞仪检测细胞在低糖条件下存活率，发现c-FLIPL通过SGLT1促进肝癌细胞在低糖条件下增殖。.细胞自噬水平与细胞能量代谢水平息息相关，目前还未见到关于c-FLIP对肝癌细胞自噬研究的报道。我们的研究中通过干涉c-FLIP表达，抑制低糖诱导肝癌细胞自噬水平，进而促进肝癌细胞在低糖条件下增殖。. 本课题首次证实c-FLIP对肝癌细胞葡萄糖代谢作用，进一步证实了c-FLIP在肝癌发生发展中的作用，为肝癌的临床诊治奠定了新的理论基础。