小胶质细胞P2X4受体在PST引起病理性疼痛中的作用及机制

坐骨神经周围给予TNF-α（PST）可引起大鼠病理性疼痛，而临床上单纯应用TNF-α拮抗剂却不能减轻坐骨神经痛。这表明：疼痛可能不是由TNF-α本身产生，可能存在更复杂的机制。近来的研究显示：TNF-α通过胶质细胞系统介导病理性疼痛，P2X4受体触发的小胶质细胞信号在病理性疼痛中发挥重要作用。最近我们发现：PST导致脊髓背角P2X4受体和p-SFKs的表达升高；抑制P2X4受体减轻疼痛。由此，我们提出"PST引起小胶质细胞P2X4受体上调，上调的P2X4受体可能通过激活小胶质细胞的信号（SFKs、MAPK）导致病理性疼痛"的假说。本项目拟采用Western blot、免疫荧光组织化学等方法，旨在获得P2X4受体及其触发的信号参与PST引起疼痛的可靠证据。本项目将进一步阐明病理性疼痛的分子机制，为确立P2X4受体作为病理性疼痛治疗的新靶点提供更充分的科学依据。

坐骨神经周围给予TNF-α（PST）可引起病理性疼痛，而临床上单纯应用TNF-α拮抗剂却不能减轻坐骨神经痛。这表明：疼痛可能不是由TNF-α本身产生，可能存在更复杂的机制。近来的研究显示：TNF-α通过胶质细胞系统介导病理性疼痛，P2X4受体触发的小胶质细胞信号在病理性疼痛中发挥重要作用。最近我们发现：PST导致脊髓背角P2X4受体和p-SFKs的表达升高；抑制P2X4受体减轻疼痛。由此，我们提出“PST引起小胶质细胞P2X4受体上调，上调的P2X4受体可能通过激活小胶质细胞的信号导致病理性疼痛”的假说。本项目拟采用Western blot、免疫荧光组织化学等方法，主要研究（1）P2X4受体在PST引起的病理性疼痛中的作用；（2）证实SFKs和MAPK家族成员是否参与PST引起的病理性疼痛；（3）探讨P2X4受体参与PST引起病理性疼痛的机制。主要研究结果如下：（1）坐骨神经周围给予rrTNF-α后，双侧脊髓背角小胶质细胞被明显激活，P2X4受体的表达明显增加，免疫荧光双染显示P2X4受体仅表达在脊髓小胶质细胞；在给予rrTNF-α前30 min，鞘内给予minocycline或TNP-ATP和PPADS，痛行为学显示minocycline、TNP-ATP明显减轻PST诱导的疼痛，PPADS对病理性疼痛的作用不明显；（2）坐骨神经周围给予rrTNF-α后，p-SFKs和p-p38的表达明显上调，免疫荧光双染显示p-SFKs和p-p38仅表达在脊髓小胶质细胞；在给予rrTNF-α前30 min鞘内应用SFKs抑制剂PP2或p38抑制剂，可减轻机械痛敏和下调脊髓背角TNF-α的表达；（3）在给予rrTNF-α前30 min鞘内应用PP2可降低p-p38的表达；在给予rrTNF-α前30 min鞘内应用TNF-α中和抗体，可减轻机械痛敏和降低p-p38及p-SFKs的表达。这些结果将进一步阐明病理性疼痛的分子机制，为确立P2X4受体作为病理性疼痛治疗的新靶点提供更充分的科学依据。在本项目的资助下，我们还进行了一些病理性疼痛的临床研究以及一些小分子RNA在神经病理性疼痛中的作用等相关研究，取得一些有意义的研究结果，为国家自然科学基金面上项目的申报奠定了良好的基础。截止至2014年12月，标注本基金资助的已发表论著共8篇，其中SCI收录论文3篇，培养在读硕士研究生4名。