大承气汤调控AR42J细胞凋亡-坏死转换分子开关的转化研究

转化研究是将临床问题与基础科研相结合以最终解决临床问题的研究方法。如何防止胰腺凋亡转换为坏死导致的轻症胰腺炎（AP）向重症转化，是急需解决的临床问题。前一项目（30400576）研究发现大承气汤能诱导腺泡细胞凋亡而减轻炎症反应和病理损伤，但其对细胞凋亡途径中 Fas/FasL、Bcl-2/Bax、 NO和Caspase-3等分子开关的确切调控作用不清，调控细胞凋亡-坏死转换以防止轻症AP重症化的药效物质基础不明。在前一项目基础上，着眼于细胞凋亡-坏死转换的分子开关，运用流式细胞仪和分子生物学方法研究大承气汤调控离体胰腺AR42J腺泡细胞凋亡-坏死转换时各分子开关的变化，筛选大承气汤调控凋亡-坏死转换的分子靶点；再以此分子靶点研究大承气汤诱导AR42J凋亡的剂量-浓度-效应关系，筛选大承气汤调控凋亡-坏死转换的药效物质基础；以大承气汤防治轻症AP重症化为契机将转化研究的新方法引入中医药研究。

急性胰腺炎病情严重程度与胰腺腺泡细胞死亡模式相关，坏死多、凋亡少时病情重；凋亡多、坏死少时病情轻，诱导凋亡、抑制坏死有助于减轻病情。本课题主要研究临床有效方剂大承气汤对胰腺腺泡细胞坏死-凋亡影响的机理及其可能的分子开关。我们先研究雨蛙肽处理的胰腺腺泡细胞模型经过大承气汤复方、单体成分处理前后细胞存活率、细胞凋亡率、凋亡-坏死比率、细胞内反应性氧物质（ROS）水平的变化，发现大承气汤能通过调节ROS以增加胰腺AR42J细胞的凋亡并减少坏死，从而初步证实大承气汤复方能调控AR42J细胞坏死-凋亡的转换。再此基础上，进一步证实了大承气汤来源的10个单体成分及其不同配位组合具有调控胰腺AR42J细胞坏死-凋亡转换的作用，其调控效应是复方>10个单体> 大黄酸+和厚朴酚+柚皮苷的混合物> 单个单体。最后，研究了柚皮苷、和厚朴酚调控坏死-凋亡转换的信号通路，其中BAX/BCL-2比值、Caspase-3可能是柚皮苷调控AR42J凋亡-坏死转换的分子开关；而Cyt C 和Caspase-3可能是和厚朴酚调控AR42J凋亡-坏死转换的分子开关。正在进行大黄酸调控离体胰腺腺泡雨蛙肽细胞模型的坏死-凋亡转换的研究。而不同的成分有不同的潜在分子开关，为进一步研究复方调控细胞死亡模式转换的分子开关，并可能基于这些潜在的分子开关进行药效物质成分筛选奠定了基础。