藤梨根中黄酮的分离鉴定及其抗肿瘤活性研究

藤梨根为猕猴桃科猕猴桃属软枣猕猴桃(Actinidia arguta Sieb. et Zucc.)的干燥根，以东北三省资源最为丰富，是满族民间习用药材，有抗消化系统肿瘤的作用。本研究初步成分预试证明藤梨根中含有大量黄酮类成分，初步的药效试验也证明藤梨根具有抗肿瘤活性。目前，关于藤梨根黄酮类成分的系统分离研究尚未见报道，为完善并开发利用该植物资源，本项目拟通过药理活性追踪的方法，对其黄酮类成分进行系统的分离纯化、鉴定，并对得到的黄酮单体成分进行抗肿瘤活性筛选，以探讨藤梨根抗肿瘤作用的药效物质基础，为开发具有自主知识产权的抗肿瘤新药奠定基础。

首先，本研究采用星点设计-响应面法优选了藤梨根中总黄酮的提取工艺。以微波功率、乙醇浓度、料液比、提取时间为自变量，总黄酮含量为因变量，通过对自变量各水平的多元线性回归及二项式拟合，用星点设计-响应面法选取最佳工艺，并进行预测分析。结果最佳工艺条件为微波功率203.56W，乙醇浓度80.34 %，料液比1：13.28，提取时间9.78min，在此最佳条件下，藤梨根中总黄酮含量的最大估计值为103.152 mg.g-1。实验结果与模型预测值相符。. 其次，筛选了大孔吸附树脂纯化藤梨根中总黄酮的工艺条件。通过动态吸附和解吸的方法，以总黄酮的吸附率、解吸率为评价指标确定树脂型号；通过最佳上样量、上样速度、水洗用量、乙醇洗脱流速、乙醇解析浓度选择、乙醇解析用量等的筛选试验，确定了纯化工艺条件。结果AB-8型大孔吸附树脂分离纯化藤梨根中总黄酮效果最好，其最佳工艺条件为：30 mL藤梨根提取液以3 BV·h-1的流速通过树脂柱，先用水8 BV洗涤，洗脱流速为3 BV·h-1，再用70％乙醇4 BV解析，洗脱流速为3 BV·h-1。AB-8型大孔树脂在所确定的优化工艺条件下，可较好地吸附分离藤梨根中总黄酮。. 再将70%乙醇洗脱液合并浓缩，进行反复的硅胶、凝胶柱层析，分离得到4种单一化合物,经薄层层析和HMR分析及参考相关文献波谱数据,鉴定出化合物I为儿茶素，化合物Ⅱ为胡萝卜苷，化合物Ⅲ为芦丁，化合物Ⅳ为槲皮素。本研究还对藤梨根中的有效成分进行了含量测定，采用HPLC法测定了藤梨根中大黄素、芦丁、大黄素甲醚和儿茶素的含量，采用紫外分光光度法测定了表儿茶素和槲皮素的含量。. 最后，开展了藤梨根提取物的药理活性研究，藤梨根总黄酮提取物在50-200ug/ml浓度范围内对BGC-823细胞具有较好的抑制率，尤其是50ug/ml浓度抑制率最大达到了85.59%。急性毒性研究中选择健康昆明种小白鼠，以灌胃方法给药，观察制备的藤梨根提取物的急性毒性反应，结果给药的最大耐受量>12.5g/kg，相当于临床用药量的250. 本课题已发表论文5 篇，还有1篇处在accepted 状态，申请专利一项。