构建腺病毒-甲病毒杂合载体用于白血病全细胞瘤苗的基因修饰

白血病全细胞基因修饰瘤苗是消除残留肿瘤细胞、预防白血病复发的有效方法，而原代白血病细胞基因转移效率低是瘤苗制备面临的主要困难之一。本研究拟将靶向性腺病毒与甲病毒复制子技术相结合，构建杂合病毒载体，提高对白血病细胞的感染效率；制备基因修饰瘤苗，在小鼠白血病模型上检测瘤苗的保护效果。先将甲病毒复制子序列插入腺病毒穿梭质粒，得到杂合穿梭质粒；再构建E4区缺失的第二代腺病毒骨架质粒；建立表达E4-ORF6基因的293包装细胞系。将报告基因（GFP）或目的基因（CD40L）克隆到穿梭质粒，与骨架质粒重组后，转染包装细胞，制备杂合病毒。利用GFP基因，检测病毒对各种造血细胞的感染效率。用携带CD40L基因的病毒感染小鼠白血病细胞系，制备基因修饰瘤苗，检测瘤苗对白血病小鼠的免疫保护作用，分析免疫保护机理。本研究将建立高效感染造血细胞的腺病毒-甲病毒杂合载体系统，探索白血病免疫基因治疗新途径。