MMSA-1与DKK1联合多表位疫苗的设计及抗骨髓瘤研究

多发性骨髓瘤是一种克隆增殖型浆细胞疾病，近年来，疫苗的快速发展为其治疗开辟了新途径。多表位疫苗是目前发展起来的一种独特疫苗设计思路，可以避免单个抗原表位多肽在体内易降解及免疫原性弱等问题。我们前期实验已证实MMSA-1及DKK1在骨髓瘤细胞中高表达，两者的表达呈正相关,且DKK1与溶骨性病变有关。在MMSA-1表位初步研究的基础上，拟用计算机分子模拟分析获取HLA-A*0201限制性MMSA-1及DKK1表位，将两种抗原表位联合成多表位肽，采用重叠延伸PCR将所选表位进行串联连接，得到多表位的DNA疫苗片段，将该片段克隆至原核表达质粒pGEX-4T中，制备原核表达的多表位肽疫苗，检测其对靶细胞RPMI8226及对化疗后残留瘤细胞的杀伤作用；建立荷瘤小鼠模型，观察接种疫苗后小鼠生存时间、瘤细胞比例及骨质破坏的改善情况。本项目旨在筛选更有效的多肽疫苗，探索多发性骨髓瘤主动免疫治疗新方式。

多发性骨髓瘤是一种克隆增殖型浆细胞疾病。近年来，疫苗的快速发展为其治疗开辟了新途径。我们利用在骨髓瘤细胞中都高表达且两者呈正相关的MMSA-1和DKK1多肽联合疫苗，通过体内外实验对二者的多肽联合疫苗进行抗骨髓瘤效果评价。体外结果显示：负载MMSA-1+DKK1联合疫苗的DC诱导的效应T细胞对骨髓瘤细胞的杀伤作用明显强于MMSA-1或DKK1单独疫苗的杀伤作用。同时，培养基中IFN-γ和IL-2的分泌量增加。利用人骨髓瘤细胞诱导的MM小鼠模型，通过各多肽疫苗治疗后，MMSA-1+DKK1联合疫苗明显缩小肿瘤的体积，并可以延长小鼠的生存期。在机制上，我们发现MMSA-1+DKK1联合疫苗增强小鼠脾淋巴细胞的CTL反应，促进IFN-γ释放以及增加CD4+ 和CD8+ T细胞的比例。同时，IL-4水平和人CD138+细胞数目都降低。最重要的是，MMSA-1+DKK1联合疫苗明显改善了小鼠的骨破坏状态。总之，MMSA-1+DKK1联合多表位疫苗是治疗MM有效的潜在疫苗之一。