TRAF7介导的细胞抗病毒信号转导功能和机理研究

We have previously identified a protein designated as TRAF7, which contains a RING finger domain at the N terminal and seven WD40 repeats at the C terminal. TRAF7 was found to be involved in MAP kinase, NF-κB and P53 signaling.Our research results showed that RNAi-mediated TRAF7 inhibited expression resulted in reduced IRF3 phosphoralation and IFNβ production induced by virus...To better understand the mechanisms of TRAF7 mediated antiviral functions and signaling pathways, more TRAF7 associated partners need to be identified by using Yeast two-hybrid(Y2H) screening.Also the TRAF7 knock out mouse model will be established, and the mechanisms of TRAF7 related antiviral functions and signaling pathways will be clearly manifested.

我们报道了一个N端含RING finger结构域、C端含7个WD40重复片段的TRAFs家族新成员TRAF7，研究证实TRAF7参与MAP激酶、NF-κB、P53等信号通路。TRAF7与TRAF2-6的N端都有RING结构域，具有E3连接酶活性，具有E3连接酶活性的TRAF2-6在病毒和其它微生物诱导的固有免疫信号通路中发挥重要作用，到目前为止，我们对TRAF7是否也参与病毒和其它微生物诱导的固有免疫信号通路还了解很少，我们的前期研究发现TRAF7也在病毒诱导的固有免疫信号通路中起重要作用，当TRAF7表达下调时，病毒诱导的IRF3磷酸化和IFNβ的表达被抑制。我们将通过寻找和研究TRAF7的相互作用蛋白、建立TRAF7基因剔除小鼠等方法对TRAF7在抗病毒固有免疫信号通路中的功能及作用机理做深入研究，为新的抗病毒药物的开发找到新的靶分子。

肿瘤坏死因子受体相关因子7是TRAFs蛋白家族最近的成员，首次被确认并被命名为TRAF7，目前我们对TRAF7的研究不是很多，对TRAF7的功能并不是很了解，已知TRAF7在不同的信号通路中扮演不同的重要角色，我们试图利用酵母双杂交筛选技术去寻找与TRAF7相互作用的蛋白，希望通过TRAF7相互作用蛋白进一步阐明TRAF7的功能和作用机制。我们用TRAF7全长做诱饵，通过酵母双杂交实验筛选到CKAP4是TRAF7的一个候选相互作用蛋白，紧接着利用免疫共沉淀的方法实验在哺乳动物细胞中证实TRAF7与CKAP4有相互作用。CKAP4-细胞骨架相联系的蛋白4（又名p63，CLIMP-63，ERGIC-63)，先前的研究证明CKAP4从核膜中分离出来并且定位在内质网膜上，而且还能够瞄定内质网到微管。我们发现单独过表达CKAP4或者TRAF7或者共表达CKAP4和TRAF7都不能激活转录因子NF-кB, AP1, ELK and C-JUN，但是过表达CKAP4+MEKK3或者CKAP4+MEKK3+TRAF7都能显著地激活转录因子NF-кB, AP1, ELK and C-JUN，此外，外加TNFα刺激会增强这种激活的效果。相反，在外加TNFα刺激的条件下，通过RNAi 抑制CKAP4的表达，NF-кB, AP1, ELK and C-JUN的活性受到明显的抑制，这些数据表明CKAP4参与调节NF-кB, AP1, ELK and C-JUN的信号通路。在TNFα刺激的条件下，CKAP4加强TRAF7的多聚泛素化，并且随着CKAP4作用时间的延长，TRAF7的多聚泛素化效果更加明显。此外，CKAP4对P38, and P42/44的磷酸化效果起决定性作用，但是对P65, P-IKBα就没有这种效果；与单独过表达CKAP4或者CKAP4+TRAF7/MEKK3相比，共表达CKAP4，TRAF7和MEKK3能使P65, P-IKBα的磷酸化效果达到最强。相反，在TNFα刺激的条件下，通过RNAi抑制CKAP4/TRAF7/CKAP4+TRAF7的表达，同时也抑制了P65, P-IKBα的磷酸化效果。在本篇文章中，我们阐明CKAP4通过与其他蛋白的协调配合积极地参与NF-кB, AP1, ELK and C-JUN的通路中，并且发挥着积极地作用。