转染α-MSH基因的人骨髓间质干细胞对肝纤维化大鼠的免疫调节

免疫调节对肝炎肝纤维化进程有重要影响。α-促黑色素细胞激素（α-MSH）具有强大的抗炎和抑制免疫作用，但半衰期短；骨髓间质干细胞（MSCs）具有自我更新能力以及独特的免疫调节功能和低免疫原性。申请人前期研究发现，肝硬化患者来源MSCs增殖力明显低于健康人来源MSCs（HMSCs），并且发现HMSCs对肝纤维化患者的CD4+ CD25+ Foxp3+ 调节性T细胞(Treg)产生影响，但对免疫功能的调节及肝纤维化的影响尚不明确。本项目拟进一步通过慢病毒载体构建表达α-MSH的HMSCs，再经肝纤维化大鼠尾静脉移植，通过流式细胞仪、RT-PCR等技术重点探讨表达α-MSH的HMSCs对肝纤维化大鼠Treg以及辅助性T细胞1和2的影响。旨在明确表达α-MSH的HMSCs对肝纤维化的免疫调节；从免疫调节角度为临床治疗肝炎肝纤维化的应用研究，特别是干细胞治疗提供依据。

课题组完成了慢病毒载体感染健康人来源骨髓间质干细胞及过表达鉴定，并发现健康人来源的骨髓间质干细胞在转染了携带α-MSH的慢病毒载体后，健康人来源的骨髓间质干细胞在细胞增殖，成骨及成脂分化，细胞表面标记方面都没有明显的变化，这些结果说明，健康人来源的骨髓间质干细胞适合作为α-MSH的表达细胞载体。在过表达的鉴定中，我们使用RT-PCR，细胞免疫荧光及B16细胞观察健康人来源的骨髓间质干细胞α-MSH的表达情况，我们发现，转染后的健康人来源的骨髓间质干细胞能够持续稳定表达α-MSH，并且，表达的α-MSH具有生物活性。课题组进行了表达生物活性α-MSH的健康人来源的骨髓间质干细胞经尾静脉注射进四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠体内，我们发现，携带α-MSH基因的骨髓间质干细胞移植依然保持低免疫原性，不会引起宿主的免疫反应；并且，能够改善肝纤维化大鼠的肝功能及肝纤维化，增加肝纤维化大鼠γ-IFN、IL-10的表达量。