妇女不孕的ZP自身免疫病因学和重组人ZP多表位肽检测抗原构建研究

将通过线性抗原表位组学研究，鉴定出人ZP4蛋白的全部精细线性表位；用ZP抗体阳性不孕妇女血清，筛查ZP抗体阳性血清中能被人ZP4若干表位识别的ZP抗体种类数，包括验证预实验中发现能被人ZP3若干表位识别的抗体种类数；构建基于人ZP3和ZP4各标志物表位最小基序的人ZP抗体检测用ZP多表位肽抗原，建立更特异灵敏的人ZP抗体检测法；最终提供排他性的实验证据链，证明ZP自身免疫是妇女不孕的病因之一。本研究的意义在于：1）将第一次提供可用于检测人ZP自身免疫病因（抗体）的基于最小基序的人ZP3和ZP4蛋白的表位标志物；2）首次证实人ZP自身免疫是导致妇女不孕的病因之一及其发生率；3）新型重组人ZP多表位肽检测抗原的研制，因其具有真正特异性（可排除人血清中固有抗体的交叉反应性）、高灵敏度（通常用单一表位肽检测一种抗体）和可获得性等优点，而展示临床检验学领域研制其他检测用抗原的新方向。

由于是人精子受体的ZP3蛋白表位鉴定，国外已报道很多，课题组也已完成它们的全部表位最小基序鉴定，因此基于项目目标之一的需要，对也是人精子受体的ZP4蛋白开展了其线性抗原表位组学研究。作为主要研究内容，本项目分别完成了人成熟ZP4蛋白的分段（相互重叠8个氨基酸残基的ZP4N58-334和ZP4C227-463）热诱导原核生物表达、用纯化重组蛋白的兔多克隆抗血清制备和用“改良生物合成肽法”的人ZP4蛋白线性抗原表位扫描作图定位。作为这一蛋白表位组学研究的核心成果，第一次明确鉴定出人ZP4蛋白全部且精细的19个线性B细胞表位（包括了之前已报道和可推断的2个表位，但未鉴定它们精细表位），其中2个为具有生物学意义的功能性表位（分别能被可抑制由重组ZP4介导精子顶体反应的两株不同单抗识别），以及1个也能被兔/狒狒抗天然猪ZP蛋白抗血清识别的广谱性表位。本项目新鉴定的人ZP4蛋白表位，为ZP自身免疫妇女血清筛选特异表位标志物，为研制重组多表位肽检测抗原或疫苗原提供了大量的候选表位（肽）。本项目结果的科学意义还在于展现了线性抗原表位组学研究可达到的目标，即结合抗体国内研究，鉴定出具有生物学意义抗体功能性表位。