miR-145对反复种植失败患者胚胎着床的调控研究

Some patients seeking in vitro fertilization and embryo transfer (IVF-ET) treatment with repeated transplantation high quality embryos are not pregnant, called repeated implantation failure (RIF). Study found that approximately two-thirds of implantation failure is due to inadequate endometrial receptivity, but the molecular mechanism is not clear, restricted the success rate of ART. miRNAs are short non-coding RNAs, at least 90% human genes may be regulated by them. In our previous research, 10 differently expressed miRNA were isolated from the midsecretory endometrium of RIF patients by using miRNA microarray. We found that miR-145 might regulate the expression of netrin4 and N-cadherin playing an important role in embryo implantation. So we will study the biological function of miR-145 during embryo implantation of RIF, and verified the target genes and mechanism of miR-145. The subject will explore the mechanism of miR-145 in embryo implantation, and will reveal the implantation failure mechanism of RIF.

体外受精-胚胎移植（IVF-ET）助孕的患者反复移植优质胚胎仍未妊娠，称为反复种植失败（RIF）。研究发现近2/3的着床失败是由于子宫内膜容受性不良造成的，但其调控的具体分子调控机制仍不清楚，成为限制辅助生殖技术（ART）成功率的瓶颈。miRNA是一类调控性非编码小分子RNA，至少90%的人类基因可能受到miRNA调控。我们前期利用基因芯片技术分析了RIF患者分泌期子宫内膜的miRNA谱，分离到与RIF相关的差异miRNA10个，其中miR-145可能通过调控转录因子netrin4和N-cadherin的表达，在胚胎着床中发挥着重要作用，但其具体作用机制尚不清楚。本研究拟对miR-145在RIF患者胚胎着床中确切的生物学功能，靶基因及其作用机制进行深入研究。本课题将从miRNA这一全新的视角，探索miR-145在胚胎着床的具体作用机制，为揭示RIF患者胚胎着床异常的机理提供新的分子依据。

项目背景：反复种植失败是辅助生殖技术的难题。研究发现反复种植失败患者的miR-145较正常妇女显著升高，但miR-145参与胚胎着床的具体作用机制不清。因此，本项目拟探索miR-145在胚胎着床的具体作用机制，为揭示RIF患者胚胎着床异常的机理提供新的分子依据。.研究内容：将过表达和无miR-145的慢病毒分别转染Ishikawa细胞，芯片检测分析两组的转录组，筛选差异基因。同时结合生物信息学分析技术，寻找miR-145的靶基因。筛选出的差异基因，再利用qPCR和Western blot技术进一步验证其表达情况。最后利用双荧光素酶实验确定miR-145与靶基因的靶向关系。另外，利用qPCR和免疫组化技术检测反复种植失败患者和正常妇女子宫内膜中miR-145靶基因的表达情况。在本课题资助下，本课题组还进行了反复种植失败患者的其他相关研究。.重要结果、关键数据：Ishikawa细胞进行病毒转染后，发现过表达miR-145的一组，miR-145的量显著增加。我们利用转录组芯片分析技术结合生物信息学分析技术，筛选出了miR-145的靶基因PAI-1。qPCR和Western blot技术检测发现，miR-145组的PAI-1的量显著下降。双荧光素酶实验进一步确定了miR-145直接靶向PAI-1的3’UTR。另外，qPCR和免疫组化技术发现反复种植失败患者子宫内膜中PAI-1的量显著低于正常妇女。另外本课题组的其他研究发现，在反复种植失败患者融胚移植前进行hCG宫腔灌注，发现可以显著改善患者的妊娠率和活产率，对年轻的反复种植失败患者效果更好。维生素D水平低下会影响IVF的受精率，但与IVF的妊娠结局无相关性。.科学意义：本项目研究结果提示miR-145可通过直接靶向并下调PAI-1的表达来影响反复种植失败患者的胚胎植入。本研究对miR-145在RIF中的作用机制提供了新的见解，提示抑制子宫内膜的miR-145可能提高反复种植失败患者的临床妊娠率。