从Wnt和胰岛素信号的对话研究“虚、毒、瘀”病机与糖尿病肾病系膜细胞增殖相关及中药的干预机制

肾系膜细胞(MCs)增殖是糖尿病肾病(DN)病理发展的重要环节。前期研究表明，胰岛素可通过其信号途径促进MCs增殖，而Wnt信号通路是MCs正常形态和生理功能所必需，2006年发现Wnt信号及其通路关键分子与糖尿病发生密切相关，成为目前新的研究热点。Wnt和胰岛素信号在DN肾MCs增殖中可能存在对话，但其分子机制不明，目前国内外尚未见文献报道。本课题拟以世界上良好的转基因MKR鼠为研究对象，通过在体与体外研究，采用免疫电镜、western blotting 、流式细胞分析等现代细胞分子生物学技术，探讨Wnt和胰岛素信号的对话在DN肾MCs增殖中的分子机制，以及DN"虚、毒、瘀"病机是否与其具有相关性，同时以滋阴益气、解毒活血立法的中药复方干预治疗进行反证，以期阐明并丰富糖尿病及其并发症"虚、毒、瘀"病机的科学内涵，并为DN临床诊疗提供科学依据，为其治疗寻找新靶点。

糖尿病肾病（DN）是严重威胁糖尿病患者生命健康的常见并发症之一，其中肾小球系膜细胞（MCs）增殖、肥大在糖尿病慢性进展性肾病的发展中处于重要地位。.Wnt／β-catenin信号为高度保守的信号通路，是调控细胞生长增殖的关键途径，肾小球纤维化过程中MCs的增殖与Wnt信号通路的激活存在密切相关。而糖尿病肾病的肾小球纤维化过程中MCs的增殖是否与Wnt信号通路的激活存在相关性是本课题的研究重点。我们推测Wnt信号通路通过与胰岛素信号的对话，在MCs的增殖中扮演了重要的角色，肾小球MCs的增殖过程中若存在活跃的Wnt信号通路则显示了Wnt信号通路的激活参与了中医“瘀阻”病机的形成，从而在糖尿病肾病的“虚、毒、瘀”病机转化中具有重要作用。. 本课题结合前期研究工作，以MKR鼠2型糖尿病肾病转基因动物模型 （“虚、毒、瘀”病机状态）、以及体外高胰岛素诱导的肾小球MCs（“因毒致瘀，毒瘀蕴积”）为研究对象，分别从在体、体外实验两方面，旨在探讨Wnt与胰岛素信号通路的对话是否参与DN肾小球MCs增殖的发生发展，并与DN“虚、毒、瘀”病机具有相关性；同时确证滋阴益气、解毒活血立法的中药复方是否通过调控Wnt信号通路而改善肾小球MCs增殖。研究结果表明：. （1）降糖益肾方通过调节MKR糖尿病肾病鼠高胰岛素血症和糖脂代谢，促进肾小球及肾小管间质ECM的降解，缓解氧化应激和炎症反应，从而改善肾功能，保护肾小球形态结构，减少尿蛋白，延缓糖尿病肾病发展。同时降糖益肾方可减少DN鼠肾皮质内PI3K及mTOR的磷酸化，抑制PI3K/mTOR 信号通路；减少肾小球β－catenin蛋白表达和核移位，抑制Wnt/β-catenin途径上下游因子。研究表明，降糖益肾方可能通过调节PI3K/mTOR及Wnt/β-catenin信号途径，抑制DN鼠肾小球系膜细胞增殖，缓解糖尿病肾病肾损伤病变过程。. （2）本实验以人肾小球系膜细胞为研究对象，在体外证明胰岛素信号通路的激活参与了高胰岛素培养的人肾小球系膜细胞（HMC）增殖，并证实降糖益肾方可调控PI3K/mTOR及Wnt/β-catenin途径关键蛋白表达或蛋白磷酸化，抑制肾小球系膜细胞增殖，在糖尿病肾病肾小球损伤过程中发挥了保护作用。