miRNA通过调控TLR4表达在OSAHS发病机制中的作用研究

We hypoxic rats by sleep apnea model clearance oxidative stress damage mechanism, and the study found that antioxidant effect simulation OSAHS patients with hypoxic/clearance and the concentration of oxygen and status of each clearance hypoxic rat animal model, the monocytes, white fine and multinucleated cells were higher than in normal group, which speculated that widely exists in mononuclear cells on the surface of TLR4 may participate in the development of OSAHS.Micrornas in the readjustment of TLR4 part has been confirmed, but about the TLR4 regulation in its role in the development of OSAHS is unclear.This project intends to research: 1, the different concentration interval hypoxic rat peripheral blood TLR4 expression level of TLR4 in different concentration interval hypoxic rats in the peripheral blood expression level whether there is a difference,2, detection of TLR4 in different concentration of intermittent hypoxia in rat lung tissue localization and expression level, and comparing with TLR4 expression level in peripheral blood;3, with different concentration interval hypoxic rats serum micrornas expression profile analysis, screening TLR expression related micrornas;4, confirm the miRNA through regulating TLR signaling pathways involved in the formation of OSAHS.

我们通过睡眠呼吸暂停模式间隙低氧大鼠氧化应激损机制及抗氧化作用的研究发现，模拟OSAHS患者间隙低氧/再氧和状态的各组浓度间隙低氧大鼠动物模型，其单核细胞、白细以及多核细胞均高于正常组，由此推测广泛存在于单核细胞表面的TLR4可能参与了OSAHS的发生发展。miRNA对TLR4的调控作用部分已经得到证实，但关于其对TLR4调控在OSAHS发生发展中的作用尚不明确。本项目拟研究：1、不同浓度间隙低氧大鼠外周血TLR4的表达水平，阐明TLR4在不同浓度间隙低氧大鼠外周血中的表达水平是否存在差异；2、检测TLR4在不同浓度间歇低氧大鼠肺组织中的定位及表达水平，并与外周血中TLR4表达水平进行比较；3、对不同浓度间隙低氧大鼠血清中miRNA进行表达谱分析，筛选出TLR表达相关miRNA；4、证实miRNA通过调控TLR信号通路参与了OSAHS形成。

阻塞性睡眠呼吸暂停（OSA）作为一种常见病、多发病，是多种全身性疾病的独立危险因素，严重危害人类健康。研究表明，炎症反应在OAS中发挥重要作用，TNF-α、CRP、ET-1等炎症因子水平在OSA 患者血浆中均显著升高。TLR4是Toll样受体（TLRs）家族中的一员，是介导内毒素/脂多糖（LPS）应答的主要受体。有证据表明，TLR4在OSA患者颈动脉斑块中表达上调，越来越多的研究也证实TLR4介导的炎症损伤与OSA的发病密切相关，但其具体调控机制尚不完全明确。microRNAs（miRNAs）是长度为20-22 nt的非编码小RNA，通过与靶基因mRNAs 3’UTR结合在转录后水平负调控靶基因表达。众多研究表明，miRNAs的表达与肺的生长发育、维持肺内稳态及肺内炎症密切相关，且部分miRNAs可特异性调控TLR4表达，调节TLR4介导的炎症信号激活水平，但miRNAs对TLR4的调控是否参与OSA介导的肺损伤尚不明确。本研究发现于健康志愿者外周血清相比，OSA患者外周血清中TLR4表达水平明显上调，且病情越严重TLR4表达水平越高；OSA大鼠血清及肺组织中TLR4表达水平、肺组织损伤程度及肺泡细胞凋亡水平亦随缺氧程度升高而升高；此外，通过对OSA大鼠及对照大鼠肺组织进行miRNAs芯片分析，发现大量差异表达的miRNAs，其中miR-337-3p下调显著，且可以靶向结合TLR4并抑制其表达；通过尾静脉注射miR-337-3p模拟物可显著降低缺氧诱导的OSA大鼠血清及肺组织中TLR4表达水平，抑制TLR4/NF-κB信号和TLR4/MAPK信号的激活，从而抑制肺组织损伤及肺泡细胞凋亡；尾静脉注射TLR4 siRNA亦可达到同样效果。根据以上研究结果，本研究证明miRNAs参与调控OSA肺损伤的发生与发展，miR-337-3p通过靶向抑制TLR4表达抑制TLR4介导的NF-κB和MAPK炎症信号激活介导的肺损伤，过表达miR-337-3p可能是防治OSA肺炎性损伤的新途径。本研究为OSA患者的诊疗提供了新的潜在分子生物标记物和分子靶点。