LAP+CD4+ T细胞在结直肠癌发病机制中的作用

A new suppressive cell:LAP+CD4+ T cel was identified in the human peripheral blood recently, this suppression ability is partly mediated through TGF-β和IL-10.But LAP+CD4+ cell in cancer has not been explored before.This item will based on the colorectal cancer, and explored the LAP+CD4+ T cell populatoin in the peripherla blood and tumor microenvironment of colorectal cancer by flow cytometry,Quantitative real-time PCR and ELISA. The relationship between LAP+CD4+ cell and CEA, clinical stage and metastasis,the phenotype,cytokine profile,and suppresion function will be also studied.The role of LAP+CD4+ T cell on the shaping up the tolerogenic tumor microenvironment and tumor immune escape will be clarified in this item, it will be facilitating the evalucatioin role of LAP+CD4+ T cell on the pathogenesis of colorectal cancer, and when designing immunotherapeutic strategy against colorectal cancer, this will supply the theory foundation.

近来，在人的外周血中发现了新的抑制性细胞：LAP+CD4+ T细胞，部分是通过TGF-β和IL-10发挥其抑制作用，但是，LAP+ CD4+ T细胞在肿瘤中的作用研究至今尚未见报道。本项目以结直肠癌为研究对象，通过流式细胞仪检测、实时定量PCR、ELISA等方法，旨在探讨结直肠癌患者的外周血和肿瘤微环境中LAP+CD4+ T细胞的情况、和CEA、临床分期、是否转移等临床因素的关系，以及LAP+CD4+ T细胞亚群的表型、细胞因子谱和抑制功能，探讨LAP+CD4+ T细胞可能在构建耐受性结直肠肿瘤微环境和肿瘤的免疫逃逸中的作用以评价LAP+CD4+ T细胞在结直肠癌发生发展过程中的作用，为结直肠癌的免疫治疗策略提供相关的理论基础。

LAP+CD4+T细胞是近年来先发现的Treg细胞亚群，它部分通过TGF-β和IL-10发挥抑制作用，而在肿瘤中的作用未见报道。本课题通过检测 LAP + CD4 + T 细胞在结直肠癌患者外周血中和肿瘤微环境中的分布情况，分析其与 CD4+CD25+Treg 及患者临床病理特征的相关性，初步探讨 LAP+CD4+T 细胞在结直肠癌发生、发展中的作用。流式细胞检测结果显示结直肠癌患者外周血［(9． 44 ±3． 18)%］高于正常人外周血［(1．49 ±1．00)%，P =0．000］、结直肠癌患者肿瘤组织［(11． 76 ±3． 74)%］高于相应癌旁组织［(3． 87 ±1． 64)%，P =0． 000］;其中肿瘤组织中 LAP+CD4+T细胞的分布比例最高。Pearson相关分析显示肿瘤组织中 LAP+CD4+T 细胞与CD4+CD25+Treg 细胞成正相关(r =0．327，P = 0．02);LAP+CD4+T细胞占 CD4+T 细胞的比例与肿瘤的 TNM 分期、远处转移及 CEA 水平相关(P ＜0．05)。LAP+CD4+T 细胞易聚集于结直肠癌肿瘤组织中，可能参与了结直肠癌的发生、发展，起到促进肿瘤生长、转移的作用。此外，利用免疫磁珠法分选出结直肠癌患者癌组织和外周血中的LAP+CD+T细胞经流式细胞术检测，细胞纯度达95%以上，表型特征：低表达Foxp3，高表达CTLA-4、CCR4和CCR5，与传统的CD4＋CD25＋ Treg不同，其调节特性不依赖于Foxp3的表达，具有独特的表型特征。RT-qPCR、液相芯片及ELISA技术检测结果显示 LAP+CD4+T 细胞通过表达高水平的抑制性细胞因子 IL－10 和 TGF－β参与肿瘤的免疫逃逸机制，拮抗IL-10和TGF-β可部分逆转LAP+CD4+T细胞的抑制功能。