携SR-BI基因微泡造影剂对动脉粥样斑块治疗作用的研究

基因治疗动脉粥样硬化是一种前沿的治疗方法。多项研究表明B族I类清道夫受体(SR-BI) 可能提供了治疗动脉粥样硬化的一个新思路。而靶向性超声微泡造影剂是一种新型基因运输工具。在超声声场的作用下，微泡经空化效应破裂后可释放出所携带的基因。同时，空化效应产生的能量在靶区的细胞膜产生声孔，使微泡所携基因可通过声孔进入细胞内，实现治疗基因的转染。课题组在前期研究中制备了较长半衰期的阳离子脂质体超声微泡造影剂，并携带报告基因转染人脐带静脉内皮细胞获得成功。本课题在此基础上，研究超声辐照下携带SR-BI基因的微泡造影剂转染实验兔的腹主动脉斑块，评估治疗效果，期望为治疗基因治疗动脉粥样硬化提供一定的技术支持。

本课题采用冻干法制备的阳离子脂质体微泡，在常温下易于保存，并且其制备方法简便，易于批量生产。光镜下观察阳离子脂质体微泡粒径分布均匀，分散度好，符合一般造影剂的要求。阳离子脂质体微泡因其表面带正电，可通过静电吸附作用与带负电的质粒DNA相互结合，从而达到载基因的目的，与单纯机械震荡法将微泡与DNA结合相比更加稳定。同时，琼脂糖凝胶电泳结果显示超声联合阳离子脂质体微泡作用SR-BI基因后不会引起基因的降解，提高了基因转染的安全性。本研究发现，随着DNA含量增大，阳离子脂质体微泡携基因的量逐渐增加，当SR-BI与其摩尔比为1:3时微泡内DNA含量达到饱和。本课题制备的阳离子脂质体微泡在体内外均取得良好的显影效果。在体内造影实验中，我们将自制的造影剂与商用超声造影剂Sono Vue进行了比较，发现自制的超声造影剂不但增强效果明显，体内显影持续时间较Sono Vue也明显延长，弥补了造影剂体内显影时间不足的缺陷。同时也确保更多的微泡携基因到达靶组织，有效提高了靶组织的基因浓度。体内外基因转染实验均证实超声联合阳离子脂质体微泡对基因转染可产生协同作用。超声联合阳离子脂质体微泡不仅能够介导SR-BI基因在SD大鼠颈动脉内高效表达，还可有效降低动脉粥样硬化大鼠的血脂水平，为基因治疗动脉粥样硬化提供一定的技术支持。