在位内膜 LncRNA BANCR 竞争性抑制 miRNA-612 上调 CPNE3 基因在子宫内膜异位症恶变中的作用机制研究

Endometriosis is a kind of gynecological common diseases. And malignant transformation of endometriosis has been a hot issue, but the pathogenesis is unclear. According to our previous study of eutopic endometrium-related methylation gene dysregulated and rat endometriosis malignant transformation model, we propose that malignant transformation of ectopic endometrial may originate from eutopic endometrial molecular biology abnormality. Due to microarray screening and pre-experiment validation, we found the expression of LncRNA BANCR was significantly increased in cancerous tissues and eutopic endometrium of the malignant transformation of endometriosis, and co-expression with CPNE3 gene. Simultaneously, the 3'UTR region of BANCR and CPNE3 gene had the same binding site of miRNA-612. Whereby it was suggested that the eutopic endometrial BANCR may competitively inhibit miRNA-612 and then upregulate the CPNE3 gene in the progression of endometriosis malignant transformation. In this study, the expression and clinical significance of BANCR, miRNA-612 and CPNE3 gene will be detected by tissue microdissection. In vitro, the effect of BANCR, miRNA-612 and CPNE3 gene on the biological behavior of eutopic endometrial cells will be performed by double luciferase assay, gene transfection and so on. To study the role of eutopic endometrial BANCR in the endometriosis malignant transformation, nude mouse endometriosis model of abdominal cavity implantation will be constructed in vivo. So that, lay the foundation for the prediction of ectopic endometrial malignant transformation through screening eutopic endometrium of patients with endometriosis.

子宫内膜异位症（内异症）是妇科常见病，内异症恶变一直是热点问题，但发病机制不清。申请人前期针对内异症恶变的在位内膜相关甲基化基因和大鼠恶变模型等研究提出：异位内膜恶变源于在位内膜分子生物学异常。经芯片筛查及预实验验证发现内异症恶变癌组织及其在位内膜LncRNA BANCR表达明显升高，并与CPNE3基因存在共表达，且两者的3’UTR区域均拥有miRNA-612的结合位点，据此提出，在位内膜BANCR竞争性抑制miRNA-612进而上调CPNE3基因参与内异症恶变。本课题拟通过显微切割取材的组织实验检测BANCR、miRNA-612及CPNE3基因表达相关性和临床意义；体外实验利用双荧光素酶实验、基因转染等研究三者相互调控对在位内膜细胞生物学行为影响；体内实验结合裸鼠腹腔种植模型，探讨在位内膜BANCR参与异位内膜恶变的作用，为实现内异症患者在位内膜预测异位内膜恶变的风险奠定基础。

本课题旨在前期研究基础上，进一步研究lncRNA BANCR、miRNA-612和CPNE3基因在内异症发生、发展、恶变过程中的分子机制，通过该研究为寻找内异症恶变早期诊断分子事件提供理论基础。同时，围绕内异症在位内膜决定论这一研究主线，通过组织、细胞、动物实验等多层次分子生物学技术，进行了在位内膜其他分子标志物在内异症及内异症恶变中的相关分子机制研究。主要内容如下：①将BANCR在内异症恶变中的作用机制作为研究重点，BANCR可通过竞争性抑制miRNA-612上调CPNE3基因的表达，进而促进细胞的迁移、侵袭和存活能力，为进一步研究内异症恶变分子机制提供了新思路。②内异症恶变其他分子标志物研究：BANCR在在位内膜异常表达可部分通过上调FAK促进在位内膜细胞发生EMT并增强迁移侵袭能力，导致异位内膜发生恶变，再次证实BANCR可能是内异症恶变在位内膜源头标志物之一。RUNX3的高甲基化与内异症恶性转化有关，“雌激素-DNMT1”信号通路可能会诱导RUNX3的高甲基化，从而促进内异症恶变。RUNX3有可能成为预测内异症恶变的分子靶标。③内异症相关分子标志物的研究：在位内膜靶基因LIMK1介导雌激素促进cofilin1磷酸化，可能是内异症在位内膜间质细胞侵袭和增殖能力增强的主要分子机制之一，为诠释雌激素对内异症的作用机制奠定了理论基础。在位内膜靶基因AC002454.1和CDK6通过促进细胞增殖、迁移、侵袭能力，促进细胞由G0/G1期向S期转化，从而影响内异症疾病进展。miR-126-5p负调控BCAR3的表达及间质细胞的迁移和侵袭能力，促进EMT。BCAR3具有对抗雌激素的功能，为深入了解局部雌激素在内异症中的作用提供新思路。总结本项目内容，得出结论：在位内膜的生物学特性不但与内异症发生发展相关，也是内异症恶变的源头。在位内膜与异位内膜具有相似的恶变风险，而异位内膜对类似雌激素类的刺激因素反应更明显。内异症恶变是值得关注的热点问题，因其恶变为内异症相关卵巢癌，严重影响患者生存时间及质量，且在早发现早治疗方面存在瓶颈，因此，在位内膜候选基因的检测有可能成为预测内异症恶变的分子靶标，对指导临床具有重要价值。