PE相关分子miR-18b的功能研究

子痫前期（PE）是妊娠期常见疾病，严重威胁母婴健康，病因至今不明，研究表明滋养细胞和胎盘血管内皮细胞功能障碍与其发病关系密切。我们在前期研究中发现，PE胎盘中存在病理性低表达的miRNA分子miR-18b，靶基因预测显示其可能对PE发病相关分子CTGF、IGF-1、ESR-1、IGF-BP2均有调控作用。该项目拟在前期基础上采用荧光实时PCR、western-blot技术检测多种PE相关分子在正常与PE胎盘组织中的表达；荧光素酶报告基因明确miR-18b与其多个靶基因的具体结合作用位点；miRNA过表达和特异性抑制技术干预miR-18b在滋养细胞和胎盘血管内皮细胞中的表达，检测其对靶基因表达的调控效应及对滋养细胞、胎盘血管内皮细胞细胞功能的影响。以期阐明PE发病的相关机制。

子痫前期(PE)是人类妊娠期特有疾病，严重威胁母婴健康，其发病机理至今不明，胎盘滋养细胞功能障碍是PE发病的病理基础。我们前期研究发现：miR-18b在PE胎盘中病理性低表达，推测miR-18b可能在维持妊娠过程中发挥重要作用，其表达失衡可能参与了PE发病过程。本项目在前期研究基础上，检测多种PE相关分子在正常与PE胎盘组织中的表达；荧光素酶报告基因明确miR-18b与其多个靶基因的具体结合作用位点及其对滋养细胞功能的影响。以期阐明PE发病的相关机制。    .结果显示：.1.实时定量结果显示子痫前期患者中miR-18b的表达量与正常孕妇相比，表达量下降，为正常孕妇的0.63倍，与我科前期基因芯片筛选结果相符。.2. 转染miR-18b对JEG-3细胞功能的影响.细胞凋亡检测结果为降调节miR-18b组与正常组相比,细胞的凋亡率显著增加（P＜0.05)；MTT检测结果显示，降调节miR-18b后细胞的增殖能力出现了明显下降，具有统计学差异（P＜0.05)；划痕法检测在JEG-3细胞降调节miR-18b 组24h后，其细胞迁移能力显著降低（P＜0.05)。.3. 在HTR-8/SVneo细胞中过表达与抑制miR-18b-5p后，real-time PCR结果显示转染mimics后的细胞中HIF-1α mRNA表达水平显著下降，差异具有统计学意义（P＜0.05）。Western-blot结果显示在细胞中过表达miR-18b-5p后HIF-1α在蛋白水平是显著降低的，差异具有统计学意义（P＜0.05）。表明miR-18b-5p与HIF-1α存在负性调控关系。.4. 双荧光素酶报告基因法结果显示：野生型HIF-1α与miR-18b-5p mimics共转染组的荧光素酶活性与对照组相比下降了25%, 差异具有统计学意义（P＜0.05）；突变型HIF-1α与miR-18b-5p mimics共转染组与对照组比较差异不明显，差异无统计学意义（P＞0.05）。