嘌呤生物合成途径中一个新基因的探索

当用MudJ(lac/Kan)诱变分离purG-lac融合株时，发现一类表型与purG::MudJ同，但与已知的purG::Tn10作转导时，Tet(r)与Kan(r)的共转导频率始终为70%左右，与共转导频率大于95%方视为同一基因相差甚远，这类突变是否发生于一个新pur基因purX。为回答这一问题首先对该基因作了克隆。采用源于LT2，以PBR322为载体的基因文库（L1B1）为供体，构建的SL4213rpurG::MudJ为受体，通过转化在不加Ade的E+3aa+Ap基础平板上选择pur(+)Ap(r)转化子，共得15个转化子，其中3个含相同大小（<9kb）质粒，编P2，P5和P15。从P15提取质粒转化构建的SL4213r purG::MudJ，在LB+Kan平板上选择Kan(r)转化子，取100个分别复印致E+3aa+Ap和E+3aa+Ade+Ap平板。结果表明：purX能互补PurG，排除了purX为新基因，一系列实验亦证明这点。