miR-26a通过ITGβ8等靶基因调控相关信号通路促进肺癌转移的作用及机制研究

Metastasis is of great importance to the clinical management. Our previous study，for the first time, reported that miR-26a enhanced metastasis potential of lung cancer cells,and demonstrated that PTEN, ITGβ8 and GSK3β were direct targets of miR-26a. In the present study, we will investigate the effect of miR-26a on lung cancer cell metastasis potential, such as migration, invasion, colony formation. By using modern technigues such as flow cytometry, qPCR, Western Blot, RNAi, we will investigate the underlying mechanism, including the effect on metastasis-related genes, the effect on target PTEN,ITGβ8,GSK3β, and targets correlated signaling pathways. We will examine miR-26a and miR-26a regulated molecules in clinical specimens, and analysis their clinical significance. The transcriptional regulation of miR-26a by transcription factors will be studied by CHIP-PCR. The tumor growth and metastasis in nude mice model will be examined by in vivo imaging system and pathological detection, targets and related molecules will also be detected in mouse tumor tissue. Furthermore, novel targets of miR-26a will be identified. This study will further explore the function of miR-26a, the mechanism of lung cancer metastasis, and provid useful information for lung cancer therapy.

转移是肺癌治疗中急待攻克的难题。项目组在国际上首次报道了miR-26a促进肺癌细胞体外侵袭迁移，并验证了PTEN、ITGβ8和GSK3β为靶基因。 本研究将通过细胞学实验，检测miR-26a对肺癌细胞体外侵袭迁移、克隆形成等能力的影响；应用流式细胞术、定量PCR、Western Blot、RNAi等方法探讨其作用机制，包括对转移相关基因的调控，对靶基因及相关信号通路的调节；运用临床标本研究miR-26a调控的相关分子及其与临床转移的相关性；应用ChIP-PCR等方法研究转录因子对miR-26a的转录调控；运用活体成像技术及病理学检查观察miR-26a对肺癌细胞在裸鼠体内成瘤性及转移的影响；通过裸鼠模型检测上述靶基因及相关信号通路中关键分子的表达。本研究还将筛选验证新的靶基因。 本项研究将进一步阐明miR-26a的功能及肺癌转移的机制，为攻克肺癌转移提供新思路。

1..项目的背景.肺癌是当今世界各国常见的恶性肿瘤，也是对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤。目前，肺癌发病率和死亡率在男性均占第一位，在女性发病率占第2位，而死亡率占第一位。据WHO统计，每年全世界估计有超过160万肺癌新患者（占全部癌症新患者的12.7%），死亡约140万人（占全部癌症死亡人数的18.2%）。肺癌最常见的病理类型是非小细胞肺癌，约占肺癌总数的85%。肺癌5年的生存率约为15%。 .转移是肿瘤病人死亡的主要原因，约90%的肺癌病人死于转移。肿瘤转移是复杂的生物学过程，包括肿瘤细胞扩散到周围组织；肿瘤细胞进入淋巴和毛细血管；肿瘤细胞转移到远端组织；肿瘤细胞形成转移灶。.miRNA 是高度保守的非编码的单链RNA, 含约20-22个核苷酸。miRNA在基因的转录后水平上，对靶基因进行负调节。这些受miRNA调节的靶基因进一步调控多种生物学行为，如发育进程，器官形成，细胞的增殖、分化、凋亡等。已有研究显示，miRNA不仅参与肿瘤的发生、发展，也在肿瘤的侵袭、转移中起重要作用。.2..主要研究内容.本项目通过体外细胞学实验，研究了miR-26a对肺癌细胞生长及侵袭转移的影响，并进一步探讨其作用机制，包括对miR-26a靶基因的验证，及通过靶基因对相关信号通路的影响。通过裸鼠肿瘤模型，研究了miR-26a对肿瘤的体内生长的影响，以及靶基因及相关信号通路的影响。.3..重要结果：.本研究发现，miR-26a可有效促进肺癌细胞的侵袭迁移能力。本研究验证了ITGβ8和GSK3β是miR-26a的靶基因。 进一步机制研究显示miR-26a通过靶基因ITGβ8和GSK3β，调控ITGβ8-JAK2/STAT3信号通路及GSK3β-β-catenin信号通路，进而促进肺癌细胞的侵袭转移。.本研究通过裸鼠肿瘤模型，发现miR-26a促进肿瘤的体内生长。机制研究显示miR-26a通过调控靶基因及相关信号通路，促进肿瘤的体内生长。.本研究已发表论文10篇，其中SCI收录论文5篇，出版英文专注1部，参加学术会议3次。.4..科学意义：.本项研究为阐明肺癌转移的机制提供新思路；也为以miR-26a为治疗靶点的转化研究提供依据，具有重要的理论意义及临床应用前景。