裸鼠人类肥大乳房模型的建立及相关因素对其增殖分化和凋亡的影响

女性乳房过度发育可形成乳房肥大甚至巨乳，它不仅影响外形，还给患者造成严重的心理负担。巨乳症的发生机制目前尚不清楚，疑与局部组织内雌、孕激素以及相关酶的含量增高有关。我们的初步研究表明肥大乳房腺体组织内雌激素受体（ER）及相关受体（ERR）含量较正常发育乳房明显相关，但其增高的原因和作用机制尚不清楚，国内外亦未见相关报道。本实验拟采用巨乳症乳腺组织分离制备肥大乳腺细胞株，建立裸鼠人肥大乳房乳腺组织模型、应用ER-α及ERR-α拮抗剂或（和）激动剂于体内和体外对裸鼠模型和肥大细胞株予以干预，观察其在增殖分化过程中细胞性质及腺体组织体积的变化及凋亡的情况，并与雌激素受体及相关受体阴性细胞做比较，探讨巨乳症发生的本质，为巨乳症的早期诊断和非手术治疗提供理论基础。

本课题分三部分探讨巨乳症发生的本质，为巨乳症的早期诊断和非手术治疗提供理论基础：一，腺性肥大乳房乳腺上皮细胞的体外培养及其增殖与凋亡的相关研究；二，青春期肥大乳房腺体组织中间质细胞与上皮细胞间的相互作用及雌激素受体共调节相关蛋白的变化；三， 用稳定表达ERα阳性的乳腺上皮细胞系构建裸鼠人类肥大乳房模型，对ERα与巨乳症的关系及作用机制的进一步探讨。所取得的研究成果为：（1）完成了乳腺上皮细胞的原代培养，同时传代培养人正常乳腺上皮细胞株HBL-100，采用各种实验技术检测评价获取原代细胞的效果，对乳腺组织病理学特点和组织及细胞中ERα的表达进行定性和定量分析；（2）给予他莫昔芬进行干预，检测细胞增殖和凋亡情况，同时对干预后的蛋白表达变化和ERα mRNA的扩增变化进行定性和定量分析。（3）完成了人乳腺上皮细胞及间质细胞的分离，应用 Percoll 纯化乳腺上皮细胞，采用Transwell及条件培养基方式进行乳腺上皮细胞和间质细胞的共培养；（4）用新型的转染试剂Attractene介导绿色荧光蛋白质粒转染人类正常乳腺上皮细胞系，优化转染条件后可得到70%的转染效率，成功构建表达雌激素受体α基因的pcDNA3.1（+）-ESR1重组质粒；(5) 用原代培养的人类肥大乳房乳腺上皮细胞构建裸鼠人类肥大乳房模型，熟练掌握了构建动物模型所需要的技术要点及理论知识，为后期实验提供了充分的技术及理论支持。