树鼩类风湿性关节炎模型TLR8及其通路分子检测方法的建立及TLR8在发病过程中的机理初探

Tree shrew is a new mode animal, close relative to human. Our preliminary research showed that composition and gene of tree shrew toll-like receptors (TLRs) are similar to that in human, through the in-depth study to TLR 8, it even showed that the reaction to ligand is the same as that in human. And by the stimulus of ligand R848 it showed up-regulated expression while TLR8 in mice showed no change. .Using tree shrews as rheumatoid arthritis (RA) model, this project detects TLR8 and its signal pathway protein so as to establish the feasible detection methods. Expected results will initiate the establishment of several detection methods, and based on these methods, the role and mechanism of TLR8 and its downstream signal pathway protein in the onset of RA disease could be discussed. It will provide new ideas and directions for the prevention and treatment of RA disease and provide further experiments for tree shrew to be an animal model for serious diseases that affect human health.

树鼩是一种与人类亲缘关系比较近的新型模式动物，本课题组前期研究表明树鼩Toll样受体（toll-like receptors，TLRs）的组成和基因结构与人TLRs相近，尤其是通过对TLR8的深入研究发现树鼩TLR8对配体的反应与人的相同，受其配体R848刺激后能上调表达，而小鼠TLR8无此功能；本项目通过利用树鼩构建类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）模型，对TLR8及其信号通路中关键蛋白进行检测，从而建立可行性的树鼩RA模型的检测方案。预期的研究结果将初步建立RA模型的多项可行性检测方法，并基于这些方法初步探讨RA 发病过程中TLR8及其下游通路分子在疾病发生过程中的作用及机制，为RA的发病及疾病的防治提供新的思路和方向，为树鼩作为人类重大疾病的动物模型提供进一步的实验基础。

树鼩是一种与人类亲缘关系比较近的新型模式动物，但作为人类重要疾病的动物模型还值得我们探究。本课题在实施过程中首先探索了树鼩佐剂型关节炎(AA)和 II型胶原诱导型关节炎(CIA)两种类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)模型的构建，并与同时构建大鼠佐剂性关节炎(AA)模型和小鼠II型胶原诱导型关节炎(CIA)模型进行比较。结果显示：采用经典的造模方法可以构建出大鼠AA模型和小鼠CIA模型，但是树鼩在模型构建过程中仅出现了一过性的、或急性的关节炎模型，关节炎症很快消失。推测其原因可能与类风湿关节炎是一种与遗传有关的自身免疫性疾病，与MHC-II类基因的易感性有关，而树鼩的MHC基因多态性及其对诱导剂的敏感性都决定了RA的发生与发展过程。其次我们分离了树鼩关节成纤维样滑膜细胞( fibroblast-like synoviocytes，FLS)，建立了树鼩TLR8信号通路及其下游通路分子mRNA及蛋白的检测方案，筛选出了用于树鼩TLR8信号通路及其下游通路分子mRNA及蛋白的检测用引物及抗体。最后我们基于树鼩FLS这个模型初步探讨了TLR8及其信号通路分子在关节FLS增殖、侵袭、破骨细胞形成及关节炎症发生过程中的作用及机制。.上述结果表明树鼩与人类相似，其对RA的敏感性可能与MHC基因多态性有关；TLR8信号通路在树鼩关节成纤维样滑膜细胞的炎症发生的过程中起到了一定的作用，可以为RA的发病及疾病的防治提供新的思路。本研究结果也为树鼩作为人类重大疾病的动物模型使用时提供了一些参考。