丙型肝炎树鼩模型的研究及普通级广西树鼩种群的建立

Hepatitis C virus (HCV) infection is a serious global public health problem. There is no effective preventive vaccine HCV infection now. Lack of appropriate animal models and cell culture system to limiting the related study of hepatitis C. Tree shrew may be an alternative animal model to human and chimpanzee in hepatitis C research. It is great significance of laboratory animal resources conservation and biomedical applications by establishment of experimental animal populations in Guangxi wild tree shrews. This study aims to establish the breeding and domesticated populations in Guangxi wild tree shrews by domesticated and breeding the wild tree shrews. To study the infection of hepatitis C virus in vivo and in vitro by ues two general class tree shrew of Guangxi and Yunnan, through intravenous injection, intraperitoneal injection, subcutaneous injection and spleen injection, and different subtypes of HCV infected serum and HCVtransfected cells. To establish a sensitive and stable solution of detecting the tree shrew HCV infection markers, and then explore the establishment of a reliable animal model of hepatitis C in tree shrews.

丙型肝炎病毒（HCV）感染是全球严重的公共健康问题之一，目前尚无有效的预防HCV感染的疫苗。缺乏合适的动物模型和细胞培养体系是制约丙型肝炎相关研究的瓶颈。当前的初步实验研究结果提示树鼩有可能是除人和黑猩猩以外能感染HCV的小动物品系。目前用于科研的树鼩主要来自云南,广西野生树鼩实验动物化及其种群的建立对我国实验动物资源保种和生物医学应用等方面具有重要的意义。本项目通过对广西野生树鼩的驯养、繁殖、育幼等方面开展研究，建立起普通级广西树鼩繁殖和驯养种群；在我们多年来从未间断进行的树鼩感染乙肝病毒模型工作的基础上，通过静脉、腹腔、皮下、脾脏等不同接种途径、利用不同的HCV亚型的人感染血清和HCV转染细胞等不同的感染源，开展广西和云南两种普通级的树鼩体内和体外感染丙肝病毒的研究，并建立一套适合于检测树鼩HCV感染标志物的灵敏和稳定的方案，以探讨建立可靠的树鼩丙型肝炎模型。

通过引进广西隆安县龙虎山地区的野生树鼩，在实验室模拟自然条件，控制光照，单只单笼饲养，通过对树鼩主要乳汁成分的检测发现树鼩乳的主要营养成分呈现高脂高蛋白低糖的类型，在饲养过程中增加了奶粉、面包虫等高蛋白高脂肪的食物以保证营养，提高了野生树鼩的存活率，初步建立广西野生树鼩驯养的规范。.本研究建立了实验室树鼩饲养繁殖管理的规范，包括饲养环境控制标准以及树鼩饲料的营养含量标准；建立了标准化普通级树鼩的饲养、繁育和驯化技术。共建立了普通级树鼩繁殖种群37对，其中昆明树鼩21对、广西隆安树鼩16对。项目期间共有115只仔树鼩成功存活，其中广西仔树鼩约40只。.本研究利用线粒体细胞色素C氧化酶亚基I基因（CO1）的一段保守区域作为DNA条形码技术的研究序列，通过对广西隆安树鼩和昆明树鼩样本进行测序、比对和分析，证实广西隆安树鼩和昆明树鼩分属不同的种群，确保建立了普通级广西隆安树鼩种群。广西隆安树鼩种群的建立将有助于丰富我国动物种子资源库，为今后合理开发和保护树鼩资源提供依据。 .通过微卫星DNA分子标记法对广西隆安和云南树鼩种群的遗传多样性进行研究，发现广西和云南树鼩两个群体的遗传多样性都较丰富，两个群体间具有较大的遗传差异和分化程度。.本研究分别采用丙型肝炎患者血清和丙型肝炎病毒细胞株HCV JFH-1培养液感染树鼩，发现3月龄前后的小树鼩接种高病毒滴度（107拷贝/ml）的感染血清可能是丙肝病毒感染树鼩比较合适的感染条件，为进一步研究树鼩丙肝模型提供了依据。本项目资助发表核心期刊论著4篇，综述3篇。获得专利授权2项。培养硕士研究生5人。