“瘀血生风”假说检验-活血熄风法干预缺血性中风大鼠的作用机理研究

为了提出和检验"瘀血生风"病机假说，我们已进行了理论文献研究、临床流行病学调查、中风病案用药规律统计分析和部分基础实验研究。本课题拟在前期实验研究的基础上，遵循中医"以方测证"的原理，借用现代医学成熟的缺血性中风动物模型（线栓法致MCAO大鼠模型），通过观察活血化瘀药物对模型大鼠的拮抗作用及在不同层面上的影响（包括神经行为和组织形态学改变以及用电镜、免疫荧光、ELISA、RT-PCR等方法和技术检测抗自由基损伤、抗炎、抗细胞凋亡、促血管再生等方面的相关因子），从整体-组织-分子-基因等层面阐明活血熄风法干预缺血性中风可能的作用机制，初步确定在中风证候演变中的关键作用因子及其与瘀血的关联性。预期成果将为证实"瘀血生风"假说提供科学数据，为中医"风气内动"病机理论补充新的内容。这不仅可以合理解释原有理论不能解释的临床经验和事实，同时可解决临床用活血化瘀药物预防和治疗多种内风病证的理论依据问题。

为了提出和检验“瘀血生风”病机假说，在前期理论文献研究、临床流行病学调查、中风病案用药统计分析和部分基础实验研究的基础上，采用大鼠永久性大脑中动脉阻塞（MCAO）方法建立局灶性脑缺血模型，灌胃给予血府逐瘀汤加减（5、10、20 g•kg-1）进行干预，通过神经症状评分评价大鼠行为学的改变，TTC 染色法观察脑梗死范围，紫外分光光度法检测缺血脑组织丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性，实时荧光定量PCR 技术检测缺血大脑皮层凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3 的mRNA表达，从整体-组织-分子-基因等层面阐明活血熄风法干预缺血性中风可能的作用机制。动物实验结果显示血府逐瘀汤可显著改善MCAO大鼠神经症状，减少脑梗死体积，降低缺血脑组织中MDA、NO含量，提高SOD 活性，同时下调缺血大脑皮层Bax、Caspase-3 的mRNA表达，上调 Bcl-2 mRNA表达。血府逐瘀汤对局灶性脑缺血大鼠脑损伤有保护作用，其作用机制可能与其抗氧化及抑制凋亡有关。本研究为"瘀血生风"假说提供科学数据，为中医"风气内动"病机理论补充新的内容。这不仅可以合理解释原有理论不能解释的临床经验和事实，同时可解决临床用活血化瘀药物预防和治疗多种内风病证的理论依据问题。