益气活血中药（灯盏生脉方）干预缺血性中风二级预防的代谢组学研究

以灯盏生脉方为载体，以"益气养阴、活血通络"的中医治则为切入点，通过代谢组学的整体效应评价与整体药效研究（整体动物模型实验）相结合揭示"益气养阴、活血通络"中药复方的配伍规律；综合化学物质组学、血清/脑脊液药物化学等研究结果，分层次、逐层递进的揭示复方药效物质基础；通过深层次的数据挖掘，结合反向分子对接等生物信息学技术进行整合分析，寻找与缺血性中风二级预防相关的代谢通路和潜在生物标志物，阐明"益气养阴、活血通络"法干预缺血性中风二级预防的作用机制，通过比较灯盏生脉方与不同配伍方（灯盏细辛、生脉方）作用通路及靶点的异同，探索"益气养阴，活血通络"中医治法作用的分子基础。

本项目旨在以灯盏生脉方为载体，通过化学物质组学、经典药理学评价及代谢组学整体效应评价等研究结合，并整合生物信息学研究结果，探索揭示中药复方药效物质基础及其作用机制的研究模式和方法。1）自上而下、逐层递进的灯盏生脉方化学物质基础研究 基于HPLC-DAD分别建立了灯盏生脉方中各子化学物质组的指纹图谱分析方法，并通过飞行时间质谱与离子阱多级质谱碎片分析分析鉴定各子化学物质组中化学成分的组成，明确各类化学成分随产地、炮制加工方法的变化规律；建立了目标成分含量高、工艺稳定可控、环境负荷小的灯盏生脉方各配伍药材有效组分制备工艺，得到组分配伍的灯盏生脉新方；建立了灯盏生脉方指纹图谱，并将常规液相转换为超高压液相色谱分析条件，实现了中药复方的高通量分析；采用飞行时间质谱与离子阱多级质谱碎片组合分析策略，对灯盏生脉方化学物质组成进行系统研究，结果表明工艺优化后灯盏生脉新方中所含各配伍药材有效成分的种类与灯盏生脉胶囊商品制剂基本相同，但有效成分含量明显高于商品制剂。2）基于血清药物化学等灯盏生脉方有效化学物质组初步推测 采用大鼠肝微粒体体外孵化初步推测灯盏生脉方有效组分的代谢途径及产物，同时采用血清药物化学研究方法测定灯盏细辛总多酚入血成分，对其有效化学物质组进行初步预测，根据灯盏细辛总多酚有效部位血中移行成分，基本明确灯盏乙素为主的灯盏花素类成分和双咖啡酰基奎宁酸类成分为其主要活性成分。3）灯盏生脉方干预大鼠大脑中动脉阻塞模型的药效学评价和作用机制初探 制备大鼠大脑中动脉阻塞模型，通过神经肌肉功能及前庭运动功能等行为学评价、脑水肿及梗死面积的测定、以及脑组织匀浆和血清中超氧化物歧化酶(SOD) 、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、丙二醛(MDA) 、一氧化氮（NO）等活性和水平的测定，评价灯盏生脉方对缺血性中风动物的治疗作用，结果表明，灯盏生脉方对缺血性中风具有良好的预防作用，且具剂量依赖性。建立了灯盏生脉方干预大鼠大脑中动脉阻塞模型大鼠生物样本（血清）的代谢指纹谱分析方法，并鉴定了潜在生物标志物。基于反向分子对接等生物信息学技术构建了灯盏生脉方潜在作用靶点网络，通过比较灯盏生脉方与不同配伍方作用通路和靶点的异同，初步阐释了复方“益气养阴，活血通络”的分子基础。项目执行期间，共发表学术论文2篇，其中1篇为SCI收载，影响因子2.82，1篇为核心期刊收载。参加国际学术会议1次。