SPLUNC1基因剔除小鼠模型的构建及其抑瘤功能研究

SPLUNC1是鼻咽组织特异表达的新基因，多年来研究证实SPLUNC1是一个重要的候选抑瘤基因，并证实其通过miR-141调控PTEN/AKT信号通路发挥抑瘤基因的作用。尽管SPLUNC1基因的抑瘤功能和作用机制研究已经取得了突破性进展，但仍然缺乏强有力的体内实验依据。本项目通过构建SPLUNC1基因剔除小鼠模型，全面考察SPLUNC1 剔除后小鼠大体表型的改变，确定与SPLUNC1 抑瘤功能相关的外在表型或其它新的表型；综合比较SPLUNC1 剔除对小鼠胚胎肺成纤维细胞增殖、周期、凋亡、细胞运动以及对细胞转化能力等的影响，对小鼠自发性/诱发性肿瘤或与c-Myc 杂交后子代鼠自发性肿瘤形成的时间、大小和生存率的影响，阐明SPLUNC1 在小鼠中的抑瘤功能；并通过基因芯片杂交和生物信息学分析，比较SPLUNC1 基因剔除对信号转导通路的影响，揭示SPLUNC1在小鼠中抑瘤的分子生物学机制。

项目执行期间，按照项目研究计划，成功地构建了SPLUNC1基因剔除小鼠模型，完成了基因剔除小鼠的鉴定及其表型观察，在分子水平、细胞水平对SPLUNC1基因的抑瘤功能及其分子机制行了深入研究。通过对SPLUNC1基因剔除小鼠的一系列研究，发现SPLUNC1能有效抑制LPS诱导的TLR4/NF-KB通路的活化，进而抑制恶性肿瘤细胞（鼻咽癌）对IL-6、IL-8等促炎因子的分泌和细胞的增殖，在肿瘤-炎症微环境中可起到显著的免疫调控作用，是一个重要的免疫调控分子，具有明显的抗炎和抑瘤功能。研究进一步证实，SPLUNC1通过下调miR-141能有效地调控EBV病毒致瘤蛋白LMP1介导的PTEN/p27-Akt通路，在EBV感染过程中阻止癌细胞的生长、促进癌细胞的凋亡和分化。在上述研究基础上，本研究根据鼻咽癌基因差异表达谱芯片数据，对全反式维甲酸（ATRA）和SPLUNC1在鼻咽癌细胞中的调控功能和机制进行了深入研究。发现ATRA能够激活SPLUNC1基因启动子活性，促进SPLUNC1的表达，同时SPLUNC1又能够增强ATRA对鼻咽癌细胞的药物敏感性，促进鼻咽癌细胞的分化，成功构建了ATRA-SPLUNC1基因调控网络。鉴于上述对SPLUNC1在鼻咽癌细胞中的抑瘤功能及其机制的充分了解，本研究对SPLUNC1基因在1015个正常和鼻咽癌患者临床样本中的表达进行了生存及预后分析，验证了SPLUNC1的抑瘤功能，发现SPLUNC1随肿瘤发生和进展过程逐步表达下调，且肿瘤组织中低表达SPLUNC1提示预后不良，建立了不同临床阶段鼻咽癌的SPLUNC1动态表达模型，显示SPLUNC1是鼻咽癌重要的临床预后标志物。这些研究较深入地阐明了SPLUNC1基因的功能与作用机制，形成了SPLUNC1基因功能研究领域的重要进展，为进一步探索炎-癌分子机制、建立SPLUNC1作为鼻咽癌的治疗靶标奠定了较坚实的研究基础。.在本项目的资助下先后培养了博士生4人，项目负责人先后以通讯作者和共同作者在FEBS Journal、Plos One、Oncogene等国际期刊发表SCI论文6篇。