枸橼酸双乙酯抗血管钙化及对Pit-1和CaSR的调控

Vascular calcification greatly contributes to the morbidity and mortality of patients with uremia. Calcium-phosphorus metabolism disorder, sodium-dependent phosphate cotransporter (Pit-1) and calcium-sensing receptor (CaSR) play roles in vascular calcification. At present scholors abroad and home notice that citric acid and its derivatives can inhibit the development of vascular calcification. But the mechanisms of such function are not completely known. For the function of diethyl citrate (Et2Cit) in vivo and in vitro, several methods were adopted including atomic spectroscopy, radionuclide and fluorescent labeling, radioligand receptor binding assay, RT-PCR, Western blot, ELISA ect. Our aims are to test Et2Cit which can bind with phosphorus and compete with Pit-1 and to identify the relationship between inflammation and CaSR. These findings may be used to further elucidate the mechanisms of vascular calcification and used as a potential treatment strategies for uremia patients.

血管钙化是影响尿毒症患者预后的重要因素。目前大量研究显示血管钙化与钙磷代谢紊乱、III型钠磷转运体（Pit-1）和钙敏感受体（CaSR）等诸多因素有关。近期国内外学者以及我们前期研究发现枸橼酸及其衍生物可抑制血管钙化的形成，但其确切机制尚不清楚。本项目通过体内和体外实验模拟尿毒症的生理环境，采用原子光谱联用技术、核素及荧光标记、放射性配体受体结合、RT-PCR、Western blot、ELISA等方法，从整体-细胞-分子层次，阐明枸橼酸双乙酯（Et2Cit）在尿毒症患者血管钙化中的作用。验证Et2Cit与磷结合，与磷竞争Pit-1上的结合位点以及炎性因子与CaSR的关系，探明Et2Cit抗血管钙化机制，为改善尿毒症患者预后提供新治疗方案。

慢性肾脏疾病患者(CKD)中，心血管疾病(CVD)的发病率及死亡率大大增加，尤其是长期接受透析的患者，其中血管钙化(VC)是导致血液透析患者CVD发生及死亡的主要原因。枸橼酸钠(Na3Cit)是血液透析过程中常用的抗凝剂，可以减轻心脏瓣膜的钙化，明显降低瓣膜组织内的钙磷水平，使钙化周围的胶原纤维明显减少，但其具体的机制尚不明确。另外Na3Cit在抗凝过程中容易发生低血症、高钙血症、高钠血症以及碱中毒等副作用。而枸橼酸双乙酯(Et2Cit)作为抗凝剂时带来的副作用轻于Na3Cit。本项目分别使用高磷、高钙(浓度均为3 mmol/L，相当于晚期CKD患者血清磷、血清钙的浓度)诱导小鼠主动脉血管平滑肌细胞(MOVAS)钙化，构造血管钙化模型，同时加入不同浓度的Na3Cit、Et2Cit及膦甲酸来研究其抗VC效果及可能的机制；另一方面，使用纳米羟基磷灰石晶体(HAp)损伤MOVAS，同时加入不同浓度的Na3Cit和Et2Cit，从分子、细胞水平系统地探讨研究了其抑制纳米HAp对MOVAS损伤的机制，期望为降低血液透析患者后期VC发病率及治疗提供新的启示，并寻找既能抗凝又能抗VC的药物，具有广泛的临床应用前景。.本项目发表论文3篇，其中1篇的IF>4，1篇的IF>2。共参加本领域会议2人次，其中国际会议2人次。培养博士生2人，硕士生3人。