延胡索乙素通过下调CaSR的表达拮抗放射性肺血管内皮细胞凋亡的作用和机制

急性放射性肺损伤是限制胸部肿瘤放疗疗效的重要临床问题，探索高效低毒的放射防护剂一直是放射防护学所面临的重要课题。肺血管内皮细胞（PVECs）凋亡是急性放射性肺损伤发生与发展的关键环节。我们研究发现延胡索乙素（THP）能够通过抑制细胞内钙超载拮抗放射性血管内皮细胞凋亡，钙敏感受体（CaSR）可能参与其中。由此，本课题提出：THP能够拮抗急性放射性肺损伤中PVECs的凋亡，这一作用可能是通过下调PVECs的CaSR表达实现的。本课题拟在已建立的大鼠急性放射性肺损伤模型的基础上，证实THP能够拮抗急性放射性肺损伤中PVECs的凋亡；并通过免疫磁珠法从大鼠肺组织中原代分离、培养PVECs，研究THP通过下调CaSR的表达拮抗大鼠放射性PVECs凋亡的作用和机制，以期为临床探索新型、高效低毒的放射防护剂奠定理论基础，并为临床防治急性放射性肺损伤提供新的治疗策略。

研究背景与目的：急性放射性肺损伤是影响胸部肿瘤放射治疗疗效的重要限制性因素，有效防止或减轻由放射所致的肺损伤能提高放疗疗效。对于放射性肺损伤，目前临床上尚没有令人满意的治疗措施。肺血管内皮细胞（PVECs）凋亡是急性放射性肺损伤发生与发展的关健环节，减轻血管内皮细胞的损伤可望成为一种防治肺损伤的有效策略之一。探索高效低毒的放射防护剂仍然是当前放射防护学迫切需要解决的难题之一。.因中草药具有作用靶点多、毒副反应低等优点。我们的前期研究发现延胡索乙素(THP)能够通过抑制细胞内钙超载拮抗放射性血管内皮细胞凋亡，细胞外钙敏感受体(CaSR)可能参与其中。由此，本课题提出THP能够通过下调CaSR的表达拮抗急性放射性肺损伤中PVECs的凋亡，从而防止或减轻急性放射性肺损伤的发生与发展。为证实假设，本课题建立大鼠急性放射性肺损伤模型，在体观察肺组织病理，应用Tunnel法、免疫组化检测PVECs的凋亡、细胞色素C、Caspase-3、Caspase-9以及Caspase-12的表达。另外从大鼠肺组织中分离培养PVECs，建立放射性细胞损伤模型。分别通过光镜及电镜观察细胞形态改变，流式细胞仪检测细胞凋亡率。流式细胞仪检测细胞内钙（[Cai2+]）、线粒体膜电位(∆ψm)生成；蛋白质印迹法检测细胞色素C蛋白、PLC、 CaSR和 NF-ΚB p65蛋白表达；酶标仪检测Caspase-3的活性变化，ELISA法检测细胞因子TNF-α, IL-1β, IL-6水平变化，荧光实时定量PCR检测CaSR的基因转录表达。结果发现，.结果：细胞经照射后，细胞形态及超微结构改变均显示典型的凋亡改变，而THP预处理组的细胞凋亡改变明显轻于其它实验组；单纯照射组血管内皮细胞内的 [Cai2+]浓度、TNF-α, IL-1β, IL-6含量 和Caspase-3的活性明显升高， ∆ψm 明显降低，而THP＋R组细胞内的 [Cai2+]浓度、TNF-α, IL-1β, IL-6含量及Caspase-3的活性明显降低，∆ψm 明显上升，组间比较差异显著。同时，THP＋R组细胞内细胞色素C蛋白、CaSR mRNA表达及PLC and NF-ΚB p65蛋白的活化水平均显著低于单纯照射组（P<0.05）。.结论：THP能够有效改善放射诱导的肺血管内皮细胞（PVECs）凋亡，这种保护作用可能与CaSR/PLC