灰霉菌致病力衰退相关RNA病毒（BcDRV）DNA形态的发现及研究

灰霉菌引起的灰霉病是危害多种经济作物的重要真菌病害。为探讨灰霉病防治的新策略，我们开展了灰霉菌致病力衰退的病毒学机制研究 （国家基金项目30570079）。发现灰霉菌菌株CanBc-1致病力衰退与真菌病毒BcDRV的感染密切相关。明确了BcDRV属于线粒体病毒（Mitovirus）（+ssRNA病毒）。在研究中我们意外发现BcDRV存在DNA形态（BcDRV-DNA）。鉴于非逆转录RNA病毒存在DNA形态的新颖性，本项目提出研究BcDRV-DNA形态，包括克隆BcDRV-DNA形态全长序列，确定BcDRV-DNA形态与BcDRV-RNA形态在灰霉菌线粒体中的共存性，研究BcDRV-DNA形态在灰霉菌核基因组或线粒体基因组中的整合性及拷贝数，探讨BcDRV-DNA形态发生的机制。研究结果将明确BcDRV-DNA形态的特征及发生机制，为揭示BcDRV-DNA形态存在的生物学意义及应用奠定基础。

灰葡萄孢是引起作物灰霉病的病原。真菌病毒BcDRV（Botrytis cinerea-debilitation related virus）感染灰葡萄孢之后，导致灰葡萄孢致病力发生严重衰退。因此，BcDRV存在着防治灰葡萄孢的潜力。本项研究对BcDRV-DNA形态开展专门研究。结果表明：感染灰葡萄孢菌株CanBc-1的BcDRV存在DNA形态。BcDRV-DNA形态的主要特征包括：①非基因组整合，即以游离态状态存在；②与BcDRV-dsRNA共存；③低滴度，即含量极低，为RNA形态的120万分之一。初步推定：BcDRV的RNA复制酶可能具有DNA复制酶活性，不过活性极低，由此导致BcDRV-DNA形态产生。为了研究转座子在BcDRV-DNA形态产生中的作用，我们在灰葡萄孢中检测到Boty、Flliper和Boty + Flliper等3种转座子类型，并成功建立了通过原生质体融合实施真菌病毒传染的技术体系。此外，研究发现感染蓖麻灰霉病菌Amphobotrys ricini的真菌病毒ArHV存在DNA形态，而且可能以整合状态存在。这些结果为深入揭示真菌RNA病毒DNA产生的机制奠定了基础。项目实施3年来累计发表SCI论文5篇，在国内外学术会议上作专题报告6人次，其中作大会特邀报告2人次。培养4名博士研究生（2人已毕业），8名硕士研究生（2人已毕业）。